蛋白印迹法

五 抗原-抗体反应

4 二抗的处理

      （1）常用二抗：HRP偶联二抗。也可用碱性磷酸酶标记二抗，但不够灵敏。

      （2）二抗稀释液：PBS/PBS-T液、TBS/TBS-T液、一般的封闭液等。

      （3）二抗稀释倍数：根据二抗说明书推荐倍数稀释二抗。也可按1：100-1：20000常规稀释倍数进行预实验选择最适稀释倍数。如二抗的浓度过高可导致非特异性条带。

      （4）二抗孵育时间：一般室温孵育1h。

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