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免疫共沉淀三

具体步骤:

      1. 细胞用预冷的PBS液洗涤2次,最后洗涤完成后吸干PBS液。

      2. 加入预冷的RIPA Buffer1ml/107个细胞、6cm培养皿、75cm2培养瓶)。

      3. 刮留细胞:用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶中上刮下,将悬液转入1.5mlEP管中,EP管插冰上,置于水平摇床上缓慢晃动15min

      4. 4℃,14000g离心15min

      5. 立即将上清液转移到一个新的离心管中。

      6. 准备Protein A琼脂糖,用PBS液洗两遍珠子,然后用PBS液配制成50%浓度。

      *为避免操作中破坏琼脂糖珠,减掉移液器枪头的尖部分。

      7. ml总蛋白中加入100ul Protein A琼脂糖珠(50%),EP管插冰上,置于水平摇床上4℃摇晃10min

      *目的是去除非特异性杂蛋白,可降低背景。


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