免疫共沉淀五
15. 14000rpm 瞬时离心 5s ，去上清，收集琼脂糖珠 - 抗原抗体的复合物。 16. 用 800ul 预冷 RIPA buffer 冲洗 3 遍。 17. 用 60ul 2 倍上样缓冲液将琼脂糖珠 - 抗原抗体复合物悬起，轻轻敲打混匀。
免疫共沉淀三
具体步骤： 1. 细胞用预冷的 PBS 液洗涤 2 次，最后洗涤完成后吸干 PBS 液。 2. 加入预冷的 RIPA Buffer （ 1ml/107 个细胞、 6cm 培养皿、 75cm2 培养瓶）。 3. 刮留细胞：用预冷的细胞刮子将细
免疫共沉淀二
优点： 1.于天然状态下相互作用的蛋白质。 2.蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响。 3.分离得到相互作用蛋白的天然符合物。 缺点： 1. 低亲和力和瞬间的蛋白
免疫共沉淀一
一、原理： 免疫共沉淀（ Co-IP ）是以研究蛋白质相互作用的经典方法，其原理基础为抗体 - 抗原之间的专一性作用。在分子病理生物学研究领域， Co-IP 是用以确定两种蛋白在完整细胞
体外SUMO修饰实验三
3.SUMO 质粒瞬时转染 （1） 将生长状态良好的细胞接种于直径 4-6cm 的培养皿中， 5% CO2 ， 37 ℃培养箱内培养 16-24h ，细胞融合至 60%-90% 时可进行转染。 （2） 转染前 1h 将细胞培养液换成
体外SUMO修饰实验二
2. SUMO 质粒 DNA 的提取 （1） 用 1.5ml 离心管取少量菌液，离心后弃掉上清液。 （2） 用 250ul P1 溶液重悬菌株，漩涡振荡使菌液重新完全悬浮。 （3） 加入 250ulP2 溶液，轻轻涡旋 4-6 次混
体外SUMO修饰实验一
2. SUMO 基因重组质粒的转化及扩增 （1） 取 10ngSUMO 基因重组质粒，加入 50ulDH α 或 JM109 感受态细胞。 （2） 冰浴 30min 42 ℃水浴，热休克 60-90s 冰浴 5min 。 （3） 在试管中加入 950ul 不含抗
SUMO背景介绍
SUMO 化修饰与一些重要疾病相关联。 SUMO 化能影响淀粉样前体蛋白产生淀粉样β肽 (A β ), 其机制尚不清楚。过表达 SUMO23, 诱导 SUMO 化 蛋白增加可抑制 ʌβ的产生 , 过表达 SUMO232K11R ( 其参
体外SUMO修饰实验三
1、 感受态细胞的制备 （6）7000g ， 4 ℃，离心 5min 收集细胞。 （7） 用 25ml 预冷 50mmol/L CaCl2 溶液重悬细胞，冰浴 30min 。 （8） 6000g ， 4 ℃，离心 5min 收集细胞。 （9） 用 4ml 预冷 100
体外SUMO修饰实验二
1、 感受态细胞的制备 （1） 准备 LB 培养基： 0.5% 酵母浸提物、 1% 胰蛋白胨、 1%NaCl(PH 7.0), 高压灭菌， 4 ℃保存备用。 （2） 准备 LB 琼脂平板：取新鲜配置的 100-200ml 的 LB 培养基，加入
