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这些生化检测常用方法,你都会吗?

简述
     生化检测(目前市场所说的癌筛、肿瘤标志物、CCVD芯片检测法等)简单来说,就是检查发现您目前是否已患疾病,然后尽可能及早治疗,避免再度恶化损害健康。这属于检测的第二个阶段,属于临床医学的范畴。

     原理
     生化检测是利用生物或化学的方法来对血液进行检测分析,从而实现对人身体健康的定期掌握。主要包括肝功能(总蛋白、白蛋白、球蛋白、白球比,总胆红素,直接、间接胆红素,转氨酶);血脂(总胆固醇,甘油三酯,高、低密度脂蛋白,载脂蛋白);空腹血糖;肾功能(肌酐、尿素氮);尿酸;乳酸脱氢酶;肌酸肌酶等检测项目;目前市场上的癌筛、CCVD芯片检测等都是属于生化检测范畴,主要包括甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原15-3(CA15-3)等肿瘤标志物的筛查,也只能通过提取血液实现检测,可以将表面健康的人区分为可能患病者(阳性)或可能无病者(阴性),筛查不具有诊断意义。

     常用生化检测分析方法
     1.终点法检测:常用的有总胆红素(氧化法或重氮法)、结合胆红素(氧化法或重氮法)、血清总蛋白(双缩脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、总胆汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、总胆固醇(胆固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白胆固醇(直接测定法)、钙(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、镁(二甲苯胺蓝法)等。以上项目中,除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外,其它测定项目 都可使用双试剂故能选用两点终点法,包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
     2.固定时间法:苦味酸法测定肌酐采用此法。
     3.连续监测法:对于酶活性测定一般应选用连续监测法,如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等,也可用连续监测法。
     4.透射比浊法:透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目,多数属免疫比浊法,载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗“O”、类风湿因子,以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。

     生化试剂优缺点
     生化试剂,目前有单试剂、双试剂,甚至有三试剂,其各自的优点和缺点,中洪博元小编建议根据以下内容来进行选择。


     单试剂优点: 省事,方便,节省试剂位,生化分析仪同时测定项目数增加。 

          缺点:抗干扰能力太差,但通过双波长测定可以减少干扰;而TG、CHO等Trinder反应的单试剂,更易受到血清中Vc的影响,造成结果偏低。
     

双试剂 优点:抗干扰能力非常强、对于某些特殊项目,如HDL、CRE,如果单试剂,是无法完成的
                 缺点:占更多的试剂位,增加试剂耗材成本。

     血清白蛋白(Alb)(溴甲酚绿法BCG)

试剂 
     1. 溴甲酚绿(BCG)贮存液:取BCG 419mg,用10ml 0.1mol/L NaOH溶解,加NaN3 100mg ,定容至1000mL。贮于棕色瓶备用。如用溴甲酚绿钠盐应称取432mg.加水溶解。 
     2. 0.1mol/L柠檬酸缓冲液(pH 4.2):分别配制0.1mol/L柠檬酸和柠檬酸钠溶液,然后按12.3:7.7的体积比例混合。每1000ml混合液加入NaN3 100mg。 
     3. 30%聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)溶液:取Brij-35 30g,加少量水,60℃水浴溶解,加水至100ml(此可用Tween-20或Tween-80代替)。 
     4. BCG应用液:BCG贮存液250ml,0.1mol/L柠檬酸缓冲(pH4.2)750ml,30%Brij-35 8ml(也可以用Tween-20 8ml或Tween-80 10ml代替)混合而成。 5.标准蛋白溶液(10mg/ml):称取白蛋白1.00g,用生理盐水。

白蛋白标准曲线绘制 
     (1) 稀释白蛋白标准液:分别精密量取白蛋白标准液0.10 mL,0.20 mL,0.40 mL,0.60 mL于试管中,再在每个管中依次加入蒸馏水0.9 mL,0.8 mL,0.6 mL,0.4 mL,混匀,得到稀释后白蛋白标准液含量分别为1.0 mg/ml,2.0 mg/ml,4.0 mg/ml,6.0 mg/ml。 

     (2) 分别精密量取每个不同浓度稀释白蛋白标准液0.2mL于试管中,空白管加入生理盐水0.2mL,设平行样,再在每个管中加入BCG应用液5.0mL,混匀后以空白管调零,立即于紫外分光光度计测吸光值,吸收波长620mn,绘制标准曲线,得出线性方程。 

     (3) 样品血清白蛋白测定:用生理盐水按1:10的比例稀释血清,取稀释后的血清0.2ml按上述方法测出其吸光值,求得其白蛋白含量。

     注意事项:
     1.BCG是一种PH指示剂,变色域为PH3.8(显黄色)~5.4(显蓝绿色),因此控制反应液的PH是本法测定的关键。
     2.配制BCG试剂也可用其他缓冲液如枸椽酸盐或乳酸盐缓冲液。但以琥
珀酸缓冲液的校正曲线通过原点,线性好,灵敏度高,成为首选推荐配方。 
     3.试剂中的Brij-35也可用其他表面活性剂代替,如吐温20或吐温80,
终浓度为2ml,灵敏度和线性范围不变。 
     4.当白蛋白标准与BCG结合后,溶液光径1,在630处测定的吸光度应
为0.811±0.035,如达不到此值,表示灵敏度较差。 
     5.蛋白质标准液是一个复杂的问题,实验证明,BCG不但与白蛋白呈色,
而且与血清中多种蛋白质成分呈色,其中以球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著,其反应速度较白蛋白稍慢。由于30S内呈色对白蛋白特异,故BCG与血清混合后,在30S内读取吸光度,可明显减少非特异性呈色反应。

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