我要啦免费统计
当前位置 :主页 > 基金课题 > 科研心得 >
毛细管电泳技术那些事儿,你掌握了吗?——实验外包

一、毛细管电泳系统基本结构及特点
     毛细管电泳系统基本结构:包括进样系统、两个缓冲液槽、高压电源、检测器、控制系统和数据处理系统。

     特点:毛细管电泳通常使用内径为25-100 μm 的弹性(聚酰亚胺)涂层熔融石英管。标准毛细管的外径为375 μm,有些管的外径为160 μm。毛细管的特点是:容积小(一根100 cm×75 μm 管子的容积仅4.4 μL);侧面/截面积比大,因而散热快、可承受高电场(100-1000 V/cm);可使用自由溶液、凝胶等为支持介质;在溶液介质下能产生平面形状的电渗流。

     二、毛细管电泳优缺点
     优点:
   (1)高效塔板数目在105-106片/m间,当采用CGE 时,塔板数目可达107片/m以上;
   (2)快速,一般在十几分钟内完成分离;
   (3)微量进样所需的样品体积为nL级;
   (4)多模式可根据需要选用不同的分离模式且仅需一台仪器;
   (5)经济实验消耗不过几毫升缓冲溶液,维持费用很低;
   (6)自动CE是目前自动化程度较高的分离方法。

     缺点:
   (1)由于进样量少,因而制备能力差;
   (2)由于毛细管直径小,使光路太短,用一些检测方法(如紫外吸收光谱法)时,灵敏度较低;
   (3)电渗会因样品组成而变化,进而影响分离重现性。
           
                                                            (毛细管电泳色谱结果图)

     三、实验操作简介
     1、提取样本DNA
     2、进行DNA变性
     3、进行DNA杂交
     4、进行DNA延伸反应
     5、进行PCR反应
     6、CE检测流程:
   (1)样品排板、建立上机清单;
   (2)4个样本各取1μL到上机板;
   (3)每孔加入9μL HiDi:Liz 500(体积比为250:1),离心、震荡混匀、再离心;
   (4)95℃变性5min,迅速降到4℃;
   (5)上ABI3730XL全自动DNA测序仪检测。
     拷贝数变异(CNV)是人类DNA遗传变异的重要来源,在广泛的疾病中发挥作用。运用毛细管电泳色谱结合探针可确定一次多重PCR反应中多达60个DNA序列的相对拷贝数,这对DNA样本中的缺失和重复辨识具有重要的研究意义。

     想要了解更多请关注:http://www.chinazglab.com/

上一篇:实验专栏丨免疫组化染色过程中遇到问题?那你需要看这里
下一篇:实验专栏丨 HE染色经验大盘点,有这一篇就够了!
分享到: