细胞划痕（修复）法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间（例如72h），取出细胞培养板，观察周边细胞是否生长（修复）至中央划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。

       一. 实验材料及试剂

       直尺、marker笔、6孔板、显微镜、酒精灯、移液枪、CO2培养箱等；PBS等。

       二、实验内容

       1、所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min（超净台内）。

       2、先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀得划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

       3、在空中加入约5×105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。

       4、第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜。

       5、用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。

       6、放入37℃，5%CO2培养箱，培养。通过显微镜拍照。       

       三、注意事项

       1、在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。

       2、铺细胞最好使用6孔板，因为6空板可以保证有相当距离的平直划痕，而且因为有5条定位线，与划痕相交，这样就有10个可固定监测点，不作重复，误差也很小。

       3、一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（＜2%）否则细胞增殖就不能忽略。

       4、实验时应注意细胞生长状况，选择适当的细胞接种浓度。对不同的细胞要观察细胞的贴壁率等，确定实验时细胞的接种数量和培养时间，保证培养终止时密度适当。

       5、如果你连续监测24小时，你需要考虑到划痕缩小是细胞迁移和细胞繁殖共同作用的结果，而不是单纯的细胞迁移。如果你要单纯的考虑细胞迁移，你可以先用丝裂霉素（1 μg/ml）处理一小时，抑制细胞的分裂，这样你的结果就是细胞迁移的作用了。另外，使用无血清培养基也可以降低增殖对实验结果的影响。

       6、照片拍完之后，可以用image J 来测量划痕区域的像素定量比较细胞迁移的速度。

       7、虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响，但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节，细胞迁移的速度也会慢很多。

         四  、划痕法测量迁移的不足之处：

       适用的细胞范围小，一般只能适用于上皮细胞、纤维样细胞。因为：

       （1）这些细胞本身有迁移能力，且较强；

       （2）细胞有极性，方便测量，观察；

       （3）细胞对无血清有较强的忍受力（至少24小时），因此很多肿瘤细胞系是不适合做划痕的。

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