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质粒的制备、提取四

二、菌落制备主要环节

(二)双酶切

      将PCR回收产物和pGL3-Basic空载体同时进行双酶切。

      1.双酶切体系

      (1)DNA回收片段酶切的试剂和剂量如下:

      Xho Ⅰ                          1ul

      Hind Ⅲ                         1uL

      DNA片段(300ng)               _uL

      DDW                            20uL

     (2)pGL3-Basic空载体酶切的试剂和剂量如下:

     Xho Ⅰ                          1ul

     Hind Ⅲ                         1uL

     质粒(500ng)                   _uL

     DDW                            20uL

     2.双酶切产物回收

     依据琼脂糖凝胶回收试剂盒操作进行。


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