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启动子质粒九

三、 质粒提取 (三) 质粒的纯化 1. 将之前提取好的质粒放入 1.5ml 离心管中,加入 1/10 体积的 3mol/L 无菌乙酸钠溶液。 2. 加入 2 倍体积的无水乙醇,放置于 -20 ℃沉淀 4-6h 或过夜。 3

启动子质粒八

三、 质粒提取 (三) 质粒的纯化 1. 将之前提取好的质粒放入 1.5ml 离心管中,加入 1/10 体积的 3mol/L 无菌乙酸钠溶液。 2. 加入 2 倍体积的无水乙醇,放置于 -20 ℃沉淀 4-6h 或过夜。 3

启动子质粒七

三、 质粒提取 8、 将吸附柱放入收集管内,离心得到的上清转移至吸附柱,室温, 15000rpm ,高速离心 30s 。 9、 弃废液,将吸附柱放入收集管,加入 700ul WB 溶液到吸附柱中, 15000rpm ,

启动子质粒六

三、 质粒提取 (二) 收获细菌并裂解 1. 离心扩增好的菌液,按说明书将菌液重悬,转入 1.5ml 离心管中。 2. 用质粒小量抽提试剂盒,按说明书要求提取质粒。 3. 细菌高速离心 1min, 彻

启动子质粒五

三、 质粒提取 (一) 摇菌培养 1. 将鉴定测序正确的克隆菌液涂在 LB 固体平板。 2. 置于 37 ℃恒温培养箱,培养 12-17h ,待长出菌落。 3. 灭菌 15ml 离心管内加入 5ml 含抗生素的 LB 液体培

启动子质粒四

二、 菌落制备主要环节 (四) 转化 8、 制备加抗生素的 LB 琼脂平板:取出 50 ℃预热的灭菌 LB 琼脂培养基,按照终浓度 100 ug/ml 加入抗生素,摇匀,将 LB 培养基倒入灭菌的培养皿中,

启动子质粒三

二、 菌落制备 主要环节 (四) 转化 1、 将感受态细胞 DH5ɑ 从 -80 ℃冰箱中取出,立即置于冰中,使其在冰中融化。 2、 连接产物加入 DH5ɑ感受态细胞溶液中,轻轻吹打使连接产物分布

启动子质粒二

二、 菌落制备 主要环节 (三) 连接 将回收的 PCR 产物连接入 pGL3-Basic 载体中,反应体系如下: T4 连接酶 1uL 5×buffer 1uL 酶切质粒( 50ng ) _ul 酶切 DNA 片段( 100ng ) _uL DDW 20uL * 16℃连

给你一把 CRISPR-Cas9 大剪教你玩转小鼠基因编辑

在最新出版(2016.02)的冷泉港实验指南的头版,详细阐述了 CRISPR-Cas9 系统在小鼠基因编辑中应用。 在现代生物学中,实现对小鼠基因进行编辑或许是最重要的进步之一。然而,传统基

启动子质粒一

二、 菌落制备主要环节 (二) 双酶切 将 PCR 回收产物和 pGL3-Basic 空载体同时进行双酶切。 1. 双酶切体系 (1) DNA 回收片段酶切的试剂和剂量如下: Xho Ⅰ 1ul Hind Ⅲ 1uL DNA 片段( 300

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