双荧光素酶报告基因检测 (miRNA靶基因验证)实验二

实验目的:  验证hsa-mir-21与靶基因Tropomyosin 1 3UTR是否发生作用并进一步确定hsa-mir-21与靶基因Tropomyosin 1 3UTR的作用位点

实验材料 

      1. 质粒与细胞株

       pMIR-对照质粒(和元生物);pMIR-TPM1-WT野生型3UTR实验质粒(和元生物);pMIR-TPM1-MUT突变型3UTR实验质粒(和元生物); pRL-CMVE2261Promega);293T细胞株来源于ATCC,细胞培养条件为DMEM+10% FBS+5% CO2。  

      2. 实验试剂

       lipofectamine 200011668-019, invitrogen; 胎牛血清(FBS)SV30087.02Hyclone); DMEM12800-017GIBCO); 胰酶(Trypsin-EDTA)(11668-500Invitrogen); 24孔板(3524Corning; miR-X mimics(和元生物);Dual-Luciferase Reporter Assay SystemE1910Promega); Opti-MEM31985-062, invitrogen)。  

      3. 仪器设备

      荧光显微镜(IX71,奥林帕斯);CO2培养箱(3111Thermo);生物安全柜(BSC --A2,上海净化); 低速离心机(TDZ4-WS,上海湘仪); 血球计数板 (REICHERTBright-Line);  水浴锅(HWS12,上海一恒);酶标仪(Infinite M1000TECAN)  

      4. 统计学处理  GraphPad PrismVer5GraphPad Software) 作图,并进行双侧t检验。


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