4.实验步骤  

实验共分以下3个主要步骤：  

      1. 质粒转染细胞；2.双报告基因检测；3. 统计学分析。

1.质粒转染细胞：  

(1) 细胞铺板：将细胞按70%的汇合度接种到96孔板。

(2) 转染：16小时后转染萤光素酶报告基因质粒和RNA，每个样品设置6个复孔

1) 配制DNA和转染试剂: 96孔板转染质粒时每孔比例Firefly：Renilla：转染试剂=0.1μg：0.01μg：0.25μl  

2) 配制RNA和转染试剂稀释液，RNA的终浓度为100nM，转染试 剂每孔0.25μL  

3) 稀释好的DNA和RNA及转染试剂，常温孵育5min  

4) 将稀释好的DNA和RNA分别和转染试剂混匀，常温孵育20min

5) 每孔弃去50ul培养基，将25μL DNA转染混合液和25uL RNA转 染混合液分别添加到每孔细胞样品中，  

6) 转染6小时后，换新鲜完全培养基 

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