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慢病毒包装

慢病毒(Lentiviruses)属于逆转录病毒科。慢病毒核蛋白质前整合复合物具有噬核特性,病毒基因组运输至细胞核,从而使慢病毒可以感染和在非有丝分裂细胞中复制。这一特性使慢病毒成为基因治疗的转移载体。 HIV (Human immunodeficiency virus) 、EIAV (Equine infectious anemia virus) 、  FIV (Feline immunodeficiency virus) 、 SIV (Simian immunodeficiency virus) 。其中研究最多最为透彻的是HIV。

 

重组慢病毒的产生:瞬时转染法,即将包装结构和载体结构瞬时共转染法如293T 高表达细胞系而产生重组慢病毒。此法非常成功,大多实验室采用此法。包膜质粒、包装质粒与载体质粒共转(多用磷酸钙共沉淀法)染293T细胞直接产生生产细胞。最后重组慢病毒分泌到培养基中进行培养而得到大量载体慢病毒。

 

三质粒来包装产生重组慢病毒:

 

 

慢病毒包装实验流程如下:

 

1.根据目的基因相关信息(序列,基因序列号等)获取目的基因;
 

2.根据客户要求选择对应载体;

 

3. 将目的基因构建到慢病毒载体获得含有目的基因的重组载体;

 

4. 测序鉴定重组质粒,高纯化(不含内毒素)提取的重组质粒;

 

5. 使用高纯提重组载体和慢病毒包装质粒共转染293FT 细胞,进行病毒包装并收集上清液;

 

6. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒;

 

7. 使用病毒液感染293T细胞,药物筛选细胞,构建稳定表达细胞系。


此文转载来源:丁香通


 

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