分子提取方法9

DNA提取

(一)培养细胞DNA提取

2、试剂

PBS缓冲液、细胞裂解液、蛋白酶K溶液、tris饱和酚、氯仿、TE缓冲液、RNaseA 3M醋酸钠(PH 7.4)、乙醇等。

3、破碎细胞、释放核酸(一)

      (1)取对数生长期细胞,1×106~109个细胞。

      (2)弃上清液,PBS液冲洗2次。

      (3)加入约250ul细胞裂解液,缓慢混匀。

      (4)37℃孵育20min

      (5)加入适量蛋白酶K(终浓度达到100ug/ml),混匀。

      (6)55℃,水浴1H

      (7)加入150ulTris饱和酚(PH8.0),混匀。

      (8)加入等体积(150ul)氯仿,轻柔混匀1min

      (9)12000rpm,室温,离心10min


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