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分子提取方法(十)

DNA提取
(一)培养细胞DNA提取
2、试剂
PBS缓冲液、细胞裂解液、蛋白酶K溶液、tris饱和酚、氯仿、TE缓冲液、RNaseA 、3M醋酸钠(PH 7.4)、乙醇等。
3、破碎细胞、释放核酸(一)
(1)取对数生长期细胞,1×106~109个细胞。
(2)弃上清液,PBS液冲洗2次。
(3)加入约250ul细胞裂解液,缓慢混匀。
(4)37℃孵育20min。
(5)加入适量蛋白酶K(终浓度达到100ug/ml),混匀。
(6)55℃,水浴1H。
(7)加入150ulTris饱和酚(PH8.0),混匀。
(8)加入等体积(150ul)氯仿,轻柔混匀1min。
(9)12000rpm,室温,离心10min。
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