流式实验步骤  

      收集对数生长期A549细胞，计数，以(1～5)×105个/孔接种于6孔板，置37℃，5％CO2条件下培养过夜，使细胞贴壁；次日更换培养液，各孔分别加入含有不同浓度茶氨酸的细胞培养液2 mL/孔，继续常规培养；每24 h同法换液一次；  在药物处理48 h后，以不含EDTA的胰酶消化并收集细胞于流式管1000 r/min离心5 min，弃上清。冷PBS洗涤细胞3次，离心弃上清；  按照Annexin-V-FITC细胞凋亡检测试剂盒的说明，向细胞中加入Binding buffer 150 μL/管和Annexin-V 5 μL/管，振荡混匀。室温、避光反应15 min；  再次加入Binding buffer 100 μL/管和PI染料5 μL/管，振荡混匀； 用流式细胞仪检测细胞凋亡。  

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