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白细胞介素8(IL- 8)检测实验

实验方法原理

      采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体,其中一株(4D7)作为包被抗体,以识别和结合待检标本中的IL-8,另一株作为酶标抗体,与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。


实验材料

      抗体   标准品   ABTS


试剂、试剂盒

      缓冲液   PBS


仪器、耗材

      ELISA板


实验步骤

1.  包被
      pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1 μg/ml,加入96
孔板,100 μl/孔,放4 ℃,36 小时。


2.  封闭
      0.1 %吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次,加3 %BSA Buffer A(Buffer B)
200 μl/孔,放37 ℃,1 小时。

3.  加待检样品
      Buffer A 冲洗96孔板三次,加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100 μl/
孔,放37 ℃,3 小时。

4.  加酶标抗体
      Buffer A冲洗96孔板五次,3 %PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800,加
入96孔板,100 μl/孔,放37 ℃,1 小时。


5.  显色

      Buffer A冲洗96孔板五次,pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS)),0.2 mg/ml,加3 %H2O2,2 μl/ml,加入96孔板,100 μ/孔,室温下或37 ℃显色。



注意事项


      1.  待检标本如为血清,应采用一次性容器,血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。



             此文转载:丁香通




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