葡菊球菌A蛋白可以结合数种哺乳类动物的免疫球蛋白，在该亲和层析方法中，采用蛋白A-Sepharose介质以及pH分步洗脱法分离鼠的抗体。

实验材料

      蛋白质

试剂、试剂盒

      Tris   腹水液   宁酸盐缓冲液   甘氨酸   乙酸盐缓冲液

仪器、耗材

      超滤器   滤膜

实验步骤

      1.  将蛋白A-Sepharose置于Tris缓冲液中（超过50倍的量，v/v）充分溶胀。在室温下将其灌入直径为2.5 cm 玻璃层析柱中，用Tris缓冲液使其平衡。

      3.  依次用2~3倍柱床体积的柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液液以及甘氨酸·Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白，洗脱下的蛋白直接接入装有中和缓冲液的管中，中和缓冲液的体积应为所收集蛋白体积的1/4。

      4.  采用ELISA法检测抗原特异性MAb。

      5.  在超滤器中浓缩所分离的单克隆抗体到1~5  mg/ml，所用超滤膜为XM50，将单克隆抗体存于-20℃。

                  此文转载：丁香通