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HE染色技术几种常见的染色问题

1.脱蜡方面:

切片中白色的区域脱蜡不彻底,染色液由于石蜡斑点的残留而不能渗透着色。

 原因:①烤( ) 片温度太低,脱蜡前没有充分烤( ) 干。 ②二甲苯脱蜡时间不足, 或二甲苯使用过久,造成脱蜡不尽。

 对策:①用无水乙醇去掉玻璃片上的水分,重新二甲苯脱去石蜡。 ②切片需退回到脱蜡步骤,延长脱蜡时间,或更换二甲苯,脱色、漂白、重新染色。

2.染色:

1)苏木素染色方面

 A.苏木素染色太浅,细胞核与细胞质颜色对比度差。

 原因:染色时间短;苏木素过度氧化,失去染色能力;分化时间过长。

 对策:切片重新染色。

 B.细胞核过染, 核膜、核仁等不清晰, 细胞质( 尤其是皮肤上皮细胞) 含有大量的细胞核染色液苏木精, 导致细胞核与细胞质比例失调。

 原因:染色液时间过长、切片太厚、分化步骤时间太短。

 对策:如果切片不是因为太厚,那么就因该脱色、

          重新染色, 对于染色和分化时间做些适当的调整。

          若太厚则需要重新切片。

C.切片细胞核染后呈棕色,这表明苏木精没有充分蓝化, 或苏木精过度氧化失去染色能力

 原因:苏木精染色液过度氧化和切片在苏木精染液染色后返蓝不足。

对策:染色前检查苏木精染色液的染色能力,过渡氧化,应及时更换。其次,在苏木精染色后, 给切片以足够的蓝化时间。

 

 

D.染色后有杂质

 

原因:苏木精染色液中的金属膜黏附在玻片上。

对策:每天染色前仔细过滤苏木精染色液,或建议使用半氧化苏木精染色液。

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