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小鼠肠系膜微循环实验实验指导

【目的】
 1.学习动物微循环显微观察方法。
 2.观察药物对小鼠肠系膜微循环障碍的影响。

【原理】借助微循环显微观察系统,直接观察微血管特别是毛细血管的数量和形态,血液特别是血细胞在血管内的流动状态,以及毛血管周围状态,了解用药前后肠系膜微循环的变化。

【器材】 显微镜或显微录像系统、冷光源、小鼠肠系膜观察台、恒温 水浴 、手术器材、注射器等。

【药品】 复方扶芳藤合剂(原液)不含糖醇提物、0.004%去甲肾上腺素(NA)、0.4%戊巴比妥钠溶液

【动物】 小白鼠

【方法】
 1.选取禁食12h以上小鼠10只,体重20~22g,雌雄各半。
 2.麻醉:0.4%戊巴比妥钠溶液0.2ml/10g体重,ip。
 3.手术:腹部切开一小口→轻轻拉出一段回肠→平铺于特制的有机玻璃灌流小池上,内盛有37±1℃任台氏液,以保持活体标本的恒温、恒湿、恒pH和一定的离子浓度。
 4.用显微镜放大100倍,选择肠系膜微血管(选用毛细血管与1mm横线相交点)进行观察。
  (1) 在视野下局部滴注NA 0.1ml造成微循环障碍。
  (2) 在视野下局部滴注受试药物0.1ml(对照组给予同体积
  的NS),观察药后血流速度的变化。
血流速度:
 ①线流:血流快,呈光滑的索状,毫无颗粒感。
 ②线粒流:血流快,呈光滑的索状,稍有颗粒感。
 ③粒线流:血较流快,连续成线,有明显颗粒感。
 ④粒流:血较流快,轴流,缘流混杂,如泥沙流。
 ⑤粒缓流:血流呈泥沙状,连续缓慢流动。
 ⑥粒摆流:血流呈泥沙状,前后摆动,仍能流动。
 ⑦停滞:血流停滞不动。

【结果 】 观察微血管开放时间( min)的变化,结果填入表4。本实验对正常动物微循环血液流速无明显影响。

表 4 复方扶芳藤合剂对小鼠肠系膜微血管开放的影响(  

 
 

组 别 动物数(n) 给药后血管开放时间(min)
 
 

NS
复方扶芳藤合剂
 
 

【注意 

 1、温度对肠系膜微循环影响较大,应保持活体肠系膜标本在37±1℃。

 2、腹部切口以1.5~2cm为宜,切口过大肠管易涌出影响观察,切口过小寻找观察部位不便且影响循环。

 3、本实验是观察对正常小鼠微循环的影响,可预先复制微循环障碍动物模型(Animal Models),观察活血化瘀方药对微循环障碍的影响。


此文转载:丁香通

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