一、操作前准备

  1. 仪器设备

  PCR仪、37℃恒温培养箱、37℃恒温摇床、水浴锅、超净工作台、高速离心机等等。

  2. 试剂

  过表达载体质粒（pGL3-Basic等）、限制性内切酶、胶回收试剂盒、感受态大肠杆埃希菌DH5ɑ、质粒提取试剂盒等等。

二、菌落制备主要环节

  （一）扩增Lin28A启动子

  1. 以HepG2基因组DNA为模板，扩增Lin28A启动子，长度1480bp。

引物：

  上游引物：5′-CCGCTCGAGGGTGGTTACTCTCAAACAAGG-3′

  下游引物：5′-CCCAAGCTTCAGAGACTCACGGCGGGACAAG-3′

分别在上下游引物上引入XhoI/Hind Ⅲ内切酶位点。

  2. PCR产物回收

  * 依照琼脂糖凝胶回收试剂盒操作进行。

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