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质粒的制备、提取

一、操作前准备

  1. 仪器设备

  PCR仪、37℃恒温培养箱、37℃恒温摇床、水浴锅、超净工作台、高速离心机等等。

  2. 试剂

  过表达载体质粒(pGL3-Basic等)、限制性内切酶、胶回收试剂盒、感受态大肠杆埃希菌DH5ɑ、质粒提取试剂盒等等。

二、菌落制备主要环节

  (一)扩增Lin28A启动子

  1. HepG2基因组DNA为模板,扩增Lin28A启动子,长度1480bp

引物:

  上游引物:5′-CCGCTCGAGGGTGGTTACTCTCAAACAAGG-3′

  下游引物:5′-CCCAAGCTTCAGAGACTCACGGCGGGACAAG-3′

分别在上下游引物上引入XhoI/Hind Ⅲ内切酶位点。

  2. PCR产物回收

  * 依照琼脂糖凝胶回收试剂盒操作进行。

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