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免疫酶标技术

    免疫酶标技术是最常用的免疫细胞化学技术。它把抗原抗体的免疫反应和酶的高效催化作用有效地结合起来,本技术有免疫荧光的优点,又克服了它们的缺点。

    一、实验原理:PAP 的基本原量是在间接法的基础上,即在加完酶标二抗以后,再加一个PAP 复合物(过氧化物酶一抗过氧化物酶抗体复合物)。PAP 复合物为由3 个酶分子和2个抗酶抗体亚单位构成的复环形复合物,其稳定性很强,冲洗时不会脱落。在这种方法中,PAP 复合物中的抗酶抗体与特异性一抗必须来自同一种属动物。其优点是比间接法更为灵敏,而且背景染色体。

    二、实验材料:抗体

        试剂、试剂盒:PBS   H2O2 血清   DAB  苏木精

        仪器、耗材:显微镜

    三、实验步骤:

    1.  标本固定后,PBS洗涤;


    2.  1 %H2O2(或1 %H2O2甲醇)阻断内源性过氧化物,室温10~20 分钟;

    3.  PBS洗2×3 分钟;

    4.  正常血清(二抗的正常血清)孵育,室温20 分钟;

    5.  滴加一抗,室温1 小时或4 ℃过夜;

    6.  PBS洗3×3 分钟;

    7.  滴加二抗,室温30 分钟;

    8.  PBS洗3×3 分钟;

    9.  加PAP复合物,室温60 分钟;

    10.  PBS洗涤3×3 分钟;

    11.  0.04 %DAB+0.03 %H2O2显色5~10 分钟;

    12.  充分水洗;

    13.  苏木精复染,封片观察。


    想了解更多相关信息,请关注: http://www.chinazglab.com/
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