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组织切片的免疫金标记

    免疫金标记技术(immunogold labelling technique)是以胶体金作为示踪物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。胶体金是由氯金酸在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠和鞣酸等作用下,聚合成特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,故称胶体金

    实验原理:利用胶体金在碱性条件下带负电荷的性质,与蛋白质分子的正电荷基团籍静电吸引而形成牢固结合。除抗体外,胶体金还可与其它多种生物大分子,如SPA、PHA、ConA等结合。

    实验材料:组织样品

    试剂、试剂盒:免疫金标记物

    仪器、耗材:培养箱  显微镜

    实验步骤:

    1.  将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。
 
    2.  待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿溢出玻片)。
 
    3.  稀释的第一杭体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每一载玻片上加40~50 μl 抗体,应能盖住切片)。
 
    4.  用与泵相连的巴斯德吸管,在切片的一端吸去玻片上的PBS,并从另一端加上抗体,盖上加湿盒,室温温育1 h。

    5.  以PBS冼玻片3次(5 min/次),从切片一端加入新的PBS缓冲液,由另一端吸去旧的缓冲液。
 
    6.  稀释的第二抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min(每载玻片可加40~50 μl 抗体)。
 
    7.  加免疫金标记第二抗体温育2 h。
 

    8.  显微镜下观察结果或放密闭玻片盒中,室温贮放。


    9.  显微镜下观察结果,或置玻片盒中贮于4℃。


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