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网织红细胞样品的制备及分析

    实验原理:网织红细胞是一种未完全成熟红细胞。在细胞成熟过程中,其胞质中的 RNA 含量逐渐被血红蛋白所取代,因此,检测红细胞中 RNA 的含量多少,就代表了红细胞的成熟程度。从而成为检测网织红细胞的重要方法。网织红细胞计数可以判断骨髓红细胞系统造血情况。溶血性贫血时由于大量网织红细胞进入血循环,可使网织红细胞高达 0.20 或更高。急性失血后 5~10 d,网织红细胞达高峰。2 周后恢复正常。典型再生障碍性贫血病例,网织红细胞百分比常为 0.005。网织红细胞数低于 5 X 109/L 且为诊断再生障碍性贫血的标准之一。网织红细胞升高表示骨髓红细胞增生活跃,多见于各种急慢性失血溶血和治疗有效的各类增生性贫血,如缺铁性贫血、溶血性贫血、巨幼细胞性贫血等,是贫血治疗中非常高价值的监测指标。网织红细胞减低见于各种骨髓增生能力低下的疾病,尤多见于重型再生障碍性贫血等。

    实验材料:全血

    试剂、试剂盒:EDTA  Good 缓冲液  枸橼酸钠缓冲液  戊二醛缓冲液  PBS  派若宁 Y 工作液

    实验步骤:

    1. 抽取全血 0.5 ml,注入盛有 0.5 ml 的 0.1 mol/L EDTA 溶液中。

    2. 用微量取液器取 50 μI EDTA 抗凝血,置于另一离心管中,加入 Good 缓冲液 5.0 ml,以 1000 r/min 离心 5 min,连续洗 3 次。

    3. 将沉淀细胞加入 1.0 ml 枸橼酸钠缓冲液,轻轻振荡悬浮。

    4. 将悬浮液缓慢注入盛有 4 ml 0.1% 戊二醛缓冲液中固定 15 min。

    5. 上 FCM 之前,用 PBS 洗去固定液,加入 0.5 ml 0.01% 的派若宁 Y 工作液,染色 30 min 离心沉淀物,去染液,然后 1500 r/min 离心 5 min。

    6. 用 PBS 洗 1 次,以 1500 r/min 离心 5 min,去上清液,再用 PBS 将细胞悬浮,上机检测。


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