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动物组织培养准备技术之清洗与灭菌(2)

(四)消毒与灭菌

1.物理消毒法

1)射线消毒

主要是使用60CoX射线进行灭菌消毒,可用于牛血清和塑料制品的灭菌。

2)紫外线消毒

用于空气消毒,操作台面和一些不能用干热,湿热消毒的培养器皿,如塑料培养皿,培养板等,是常用的消毒方法之一。

消毒方法,现在一般用无臭氧型紫外灯。消毒的效能与消毒的距离成反比,因此应根据消毒的目的适当设置消毒距离:进行空气消毒的灯管应距地面2.50m以内;台面的消毒应在0.80m以内;培养器皿的消毒在0.30m以内。

3)干热灭菌

主要用于玻璃器皿的灭菌。

将用于细胞培养的器皿包装后放入干燥箱内,加热到160℃,保温90 ~ 120 min

用于RNA提取实验的用品则需180℃,保持5-8h

4)湿热灭菌

此方法也称为高压蒸汽灭菌,适用范围广,是最有效的灭菌方法之一。主要应用范围是布类、橡胶制品(如胶塞)、金属器械、玻璃器皿、某些塑料制品以及加热后不发生沉淀的无机溶液,如Hanks液、PBS20 × SSC(氯化钠和柠檬酸钠的缓冲液)等。用15MPa121℃)作用20 min

5)滤过除菌

用于培养用液和各种不能高压灭菌的溶液的灭菌。采用金属滤器和小型的塑料滤器,配上可以更换的微孔滤膜,极大地方便了操作。滤器型号按直径大小划分。如过滤量大的培养用液常用较大型号的金属滤器(F142mmF100mmF90mm等),配于过滤泵使用。过滤量较少的培养用液常用注射器正压推动液体通过塑料小滤器(φ25mmφ20mmφ10mm)。滤膜孔径有0.6μm0.45μm0.35μm0.22μm0.1μm等,以0.22μm除菌最为合适,但对于较黏稠难滤过的液体,可选用吸附性滤膜过滤。

在过滤器上装上孔径适当的微孔滤膜,用布包好,湿热灭菌后使用。

6)煮沸灭菌

急性灭菌可用煮沸法,器械等煮沸15min后可使用。效果不如高压蒸汽灭菌。

2.化学消毒法

常用的消毒液有如下几种。

170%(或75%)乙醇:超净台里常备70%酒精棉球(卫生级酒精),用于手和一些金属器械,或工作台面的消毒。

21‰新洁尔灭:主要用于手和前臂的清洗以及工作后的超净台面的清洁。超净台旁应常备盛有1‰新洁尔灭溶液的容器及纱布。

 (3)来苏儿水(煤酚皂):主要用于无菌室的桌椅、墙壁、地面的消毒和清洗,以及空气喷洒消毒,特别是带有污染培养的培养器皿的消毒处理。使用浓度请按瓶上的说明。

40.5%过氧乙酸:是强效消毒剂,10min即可将芽孢菌杀死。用于各种物品的表面消毒。用喷洒和擦拭方式进行消毒。

5)乳酸蒸气:用于房间空气消毒。将乳酸放入坩埚内用洒精灯或电炉加热至沸腾为止,再将加热源关掉。门窗紧闭1~3d。可将空气中漂浮的微生物杀死。

637%甲醛加入高锰酸钾:也用于房间空气消毒。使用前先紧闭门窗。将37%甲醛用酒精灯或电炉加热至沸腾后断电或灭火。用一张纸盛好适量的高锰酸钾,迅速放入已加热好的甲醛中形成蒸气。1 ~ 3d后方可达到消毒空气的目的。

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