1.目的片段接入pGEX载体；

    2.涂板，挑单克隆，摇菌至OD600≈1.0，加入IPTG（终浓度1 mM）诱导6－8 h；
    3.收菌，每升菌液约以50 mL PBS重悬，加入1%Triton X-100（v/v），1％β-巯基乙醇（v/v），PMSF（终浓度1 mM）；

    以下步骤均在冰上操作：

    4.超声破碎菌体，15000 g，10min离心取上清，在上清中加入适量GST-beads，轻轻晃动令其吸附蛋白1 h；
    5.2000 g，3min离心弃上清；
    6.加入至少10倍体积PBS，轻摇至beads悬浮于溶液中，2000 g，3 min离心弃上清；
    7.重复步骤6 两次；
    8.加入1 mL GST Elution Buffer，轻摇10 min；
    9.2000 g，3 min离心，收集上清；
    10.重复步骤8-9至少两次；
    11.SDS-PAGE电泳检测蛋白纯度，Bradford法检测蛋白浓度；
    12.将蛋白置于-20℃保存。

    P.S. 大量提取前应取少量菌液，改变IPTG浓度，诱导温度，诱导时间等，以确定蛋白表达的最适条件。（转载）

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