荧光素酶及其报告基因的应用和检测7
三 荧光素酶报告基因 报告基因（ report gene ）是一种易于检测蛋白质或酶等表达产物的基因，可通过报告基因产物的表达来“报告”目的基因的表达调控。通常把报告基因的编码序列和
荧光素酶及其报告基因的应用和检测
一 生物发光 生物发光（ bioluminescence ） 是指生物体发光或生物体提取物在实验室中发光的现象。它不依赖于有机体对光的吸收，而是一种特殊类型的化学发光， 化学能转变为光能的效
双萤光素酶报告基因检测 （miRNA靶基因验证）实验 3
4. 实验步骤 实验共分以下 3 个主要步骤： 1.质粒转染细胞；2. 双报告基因检测； 3. 统计学分析。 1. 质粒转染细胞 ： (1) 细胞铺板：将细胞按 70% 的汇合度接种到 96 孔板。 (2) 转染：
双萤光素酶报告基因检测 （miRNA靶基因验证）实验2
实验目的 : 验证 hsa-mir-21 与靶基因 Tropomyosin 1 3 ’ UTR 是否发生作用并进一步确定 hsa-mir-21 与靶基因 Tropomyosin 1 3 ’ UTR 的作用位点 。 实验材料 1. 质粒与细胞株 pMIR- 对照质粒（和元生物
细胞中mRNA原位杂交技术6
附 2 ：探针的选择与标记 1.探针选择 特异性的探针必须是一段已知的基因片段。相对于膜上杂交而言，原位杂交有特殊性。即细胞和组织中的待测基因隐藏于类似于网络状的立体结构之
细胞中mRNA原位杂交技术7
附 2 ：探针的选择与标记（续） 1. DNA 和 RNA 探针 其原理是克隆一段特异的 DNA 或 RNA 片段，装载到相应的质粒中。经过质粒扩增，酶解和纯化等步骤，就可以得到大量的 DNA 和 RNA 片段。
细胞中mRNA原位杂交技术5
附表 1 ：部分试剂配制 1 0.1mol/L 三乙醇胺 -0.25% 乙酸酐：三乙醇胺 13.2ml ，氯化钠 5g ，浓盐酸 4ml ， DEPC 水定容至约 1000ml ，临用前，一边摇动溶液一边加入乙酸酐 2.5ml ，充分混合。 2
细胞中mRNA原位杂交技术4
原位杂交 的实验步骤： 二．杂交与显色 1 、将加入探针的杂交液先于 50 ℃预热，均匀涂于切片表面，加上硅化盖玻片，放于湿盒中， 50 ℃孵育 12-16h 。 2 、 1 ×SSC （含 50% 甲酰胺），
细胞中mRNA原位杂交技术1
实验原理及技术背景 1 ： 原位杂交组化（ ISHH ）属于分子杂交的一种，是一种应用标记探针与组织细胞中的待测核酸杂交，再应用标记物的检测系统，在核酸原有的位置将其显示出来的
荧光素酶及其报告基因的应用和检测
四 荧光素酶报告基因的检测方法 依赖生物发光特性 , 利用闪烁计数器 ( scintillationcounter) 对荧光素酶的活性作出定量检测。在标准反应条件下 , 加入超量底物 , 经一定时间内 , 荧光闪烁
