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传统 ES 打靶 VS TurboKnockout® 基因敲除
    上个世纪 80 年代,随着基因重组技术的不断完善和小鼠胚胎干细胞(ES)体外培养技术的成熟,基于同源重组的 ES 打靶得以建立。ES 打靶基因敲除技术修饰准确、效果稳定、成功率极高,一直被认为是对模式动物进行特定基因修饰的金标准。但由于嵌合体阳性率低,且必须与工具鼠交配才能获得删除 Neo 的杂合子,使得构建周期长达 12-16 个月。

    20 世纪初,核酸酶基因编辑技术(TALEN、CRISPR/Cas9)出现,其周期短(6~8 个月)、无物种限制等优势迅速受到广大科研学者的青睐。但由于脱靶效应至今无法避免,也无法胜任复杂的基因敲除,因此传统 ES 打靶技术仍是首选。

    那么,如何在保持传统 ES 打靶优势的基础上优化其构建流程呢?赛业 TurboKnockout®基因敲除技术应运而生。TurboKnockout®基因敲除通过跨越 ES 打靶「嵌合体阳性率低」阶段并真正实现自删除 Neo,从而减少两代繁育时间,使 ES 打靶缩短至 6~8 个月。在核酸酶技术尚未成熟之前,TurboKnockout®将是研究者的最佳选择。

技术对比:


技术原理:
1、跨越「嵌合体」阶段:
基于 ES 打靶的 TurboKnockout®采用了独特建系的具有高效遗传优势的 ES 细胞系(实验数据表明,在获得 100% 雄性嵌合体小鼠方面,TurboKnockout® ES 细胞系是对照传统 ES 细胞系的三倍以上),通过特定胚胎发育阶段的显微注射,使 TurboKnockout® ES 细胞 100% 代替内源 ES 细胞,从而实现跨越「嵌合体」阶段。

2、实现自删除 Neo:

TurboKnockout®采用独特的 Self-deleting Neo Cassette 所获得的嵌合体,在与任何品系的小鼠交配均可百分百自删除 Neo。也就是说,TurboKnockout®不仅仅实现跨越「嵌合体」阶段,还能真正自删除 Neo 从而快速获得去 Neo 的杂合子小鼠。

技术优势:
● 基因修饰准确、效果稳定;
● 没有脱靶效应,可胜任复杂的基因敲除;
● 自删除 Neo 可进一步缩短服务周期,简化了小鼠交配流程。


此文转载于:丁香通


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