FISH和PRINS技术
发布人:管理员 浏览次数: 发布时间:2018-05-23
一、荧光原位杂交(FISH)
是一种简单、敏感、而容易操作的方法,结果迅速,并能在同一标本上检测多个不同的基因,可应用于细胞培养、染色体分裂像、冰冻切片和石蜡切片。
FISH技术是利用特异的DNA探针,标记了生物素,地高辛、或荧光素,对检测细胞进行DNA-DNA原位杂交,并用荧光法显示。
FISH实验步骤
试剂配制:
(1)变性液(70%甲酰胺 + 2×SSC,pH7.0):4 ml 20×SSC;8 ml 蒸馏水;28 ml 甲酰胺。每次新鲜配制。
(2)杂交后洗涤液: 20×SSC 4 ml;蒸馏水16 ml;甲酰胺20 ml。每次新鲜配制。调节pH前升至室温。
1. 用硅化玻片,石蜡切片,60℃烤片过夜。二甲苯脱蜡至酒精,斜置切片,空气中干燥。
2. 蛋白酶处理:
(1)每个染色缸40 ml 蛋白酶K消化溶液,配制方法如下:2×SSC 40 ml 倒入Facal管,在水浴槽中预热。将消化酶液加入管内,摇动直到酶溶解。
(2) 37℃水浴槽中预热染色缸和蛋白酶K溶液。37℃孵育20 min。
(3) 2×SSC在室温下漂洗切片3次,每次1 min。
(4)梯度酒精脱水(-20℃预冷),空气中干燥。
3. 变性:
(1)每一个立式染色缸配制40 ml 变性溶液;
(2)78℃水浴槽中平衡预热混合液染色缸;
(3)78℃孵育8 min;
(4) 即移入-20℃预冷70%酒精的染色缸内2 min,再依次移入80%、90%和100%的-20℃预冷酒精内,每缸2 min;
(5)空气干燥。
是一种简单、敏感、而容易操作的方法,结果迅速,并能在同一标本上检测多个不同的基因,可应用于细胞培养、染色体分裂像、冰冻切片和石蜡切片。
FISH技术是利用特异的DNA探针,标记了生物素,地高辛、或荧光素,对检测细胞进行DNA-DNA原位杂交,并用荧光法显示。
FISH实验步骤
试剂配制:
(1)变性液(70%甲酰胺 + 2×SSC,pH7.0):4 ml 20×SSC;8 ml 蒸馏水;28 ml 甲酰胺。每次新鲜配制。
(2)杂交后洗涤液: 20×SSC 4 ml;蒸馏水16 ml;甲酰胺20 ml。每次新鲜配制。调节pH前升至室温。
1. 用硅化玻片,石蜡切片,60℃烤片过夜。二甲苯脱蜡至酒精,斜置切片,空气中干燥。
2. 蛋白酶处理:
(1)每个染色缸40 ml 蛋白酶K消化溶液,配制方法如下:2×SSC 40 ml 倒入Facal管,在水浴槽中预热。将消化酶液加入管内,摇动直到酶溶解。
(2) 37℃水浴槽中预热染色缸和蛋白酶K溶液。37℃孵育20 min。
(3) 2×SSC在室温下漂洗切片3次,每次1 min。
(4)梯度酒精脱水(-20℃预冷),空气中干燥。
3. 变性:
(1)每一个立式染色缸配制40 ml 变性溶液;
(2)78℃水浴槽中平衡预热混合液染色缸;
(3)78℃孵育8 min;
(4) 即移入-20℃预冷70%酒精的染色缸内2 min,再依次移入80%、90%和100%的-20℃预冷酒精内,每缸2 min;
(5)空气干燥。
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