FISH和PRINS技术2
发布人：管理员 浏览次数： 发布时间：2018-03-20
4. 杂交：
（1）准备探针；
（2）取一个较大的湿盒，交叉放置切片；
（3）滴10 μl 探针在切片的组织上，加盖玻片；
（4）盖上湿盒盖，37℃孵育12~16 h。杂交后水洗：
（5）镊子小心去除盖玻片；
（6）43℃预热杂交后水洗溶液40 ml 水洗切片15 min；
（7）2×SSC（37℃）洗两次，每次10 min；
（8）切片放人染色缸的1×PBS内待检测，勿使切片干燥。
检测：
（9）从1×PBS中取出切片，除去过多的水分，避免标本干燥。把切片放入湿盒内，同时处理4张切片。
（10）每张切片使用30~60 μl 罗丹明抗-地高辛抗体或FITC卵白素，室温下孵育20 min；
（11）去掉塑料盖膜，把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室温下洗3次，每次2 min。
扩增：
（12）从1×PBS中取出切片，斜置切片使液体排出；
（13）每张切片滴30~60 μl 抗-卵白素抗体，加塑料盖膜，室温孵育20 min；
（14）去掉塑料盖膜，把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室温下洗3次，每次2 min；
（15）从1×PBS中取出切片，斜置切片使液体排出；
（16）每张切片滴30~60 μl 抗-卵白素抗体，加塑料盖膜，室温孵育20 min；
（17）1×PBS室温下洗3次，每次2 min。
5. 细胞核染色：
（1）张切片加10~20 μl DAPI，覆盖盖玻片并在室温下孵育2~5 ml；
（1）准备探针；
（2）取一个较大的湿盒，交叉放置切片；
（3）滴10 μl 探针在切片的组织上，加盖玻片；
（4）盖上湿盒盖，37℃孵育12~16 h。杂交后水洗：
（5）镊子小心去除盖玻片；
（6）43℃预热杂交后水洗溶液40 ml 水洗切片15 min；
（7）2×SSC（37℃）洗两次，每次10 min；
（8）切片放人染色缸的1×PBS内待检测，勿使切片干燥。
检测：
（9）从1×PBS中取出切片，除去过多的水分，避免标本干燥。把切片放入湿盒内，同时处理4张切片。
（10）每张切片使用30~60 μl 罗丹明抗-地高辛抗体或FITC卵白素，室温下孵育20 min；
（11）去掉塑料盖膜，把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室温下洗3次，每次2 min。
扩增：
（12）从1×PBS中取出切片，斜置切片使液体排出；
（13）每张切片滴30~60 μl 抗-卵白素抗体，加塑料盖膜，室温孵育20 min；
（14）去掉塑料盖膜，把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室温下洗3次，每次2 min；
（15）从1×PBS中取出切片，斜置切片使液体排出；
（16）每张切片滴30~60 μl 抗-卵白素抗体，加塑料盖膜，室温孵育20 min；
（17）1×PBS室温下洗3次，每次2 min。
5. 细胞核染色：
（1）张切片加10~20 μl DAPI，覆盖盖玻片并在室温下孵育2~5 ml；
（2）尽可能快的在荧光显微镜下观察或封闭盒内保存在-20℃冰箱。切片在染色之后1h内可以在显微镜下观察。（转帖）
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