下述方案是经修改过的 Trizol 方案，用于从植物组织中分离 RNA，其中增加了一个高盐异丙酵沉淀步骤，以选择性地沉淀 RNA，而将多聚糖和蛋白多糖留在溶液里。

实验材料         

植物组织

试剂、试剂盒        

 

Trizol氯仿异丙醇乙醇DEPC处理过的水液态N2NaCl柠檬酸钠

仪器、耗材    

转子-定子均化器研钵和杵圆锥形管

实验步骤    

    

一、材料

 

1. 缓冲液、溶液和试剂

 

Trizol(Invitrogen)

 

氯仿

 

异丙醇

 

乙醇，70%，用焦碳酸二乙酯（DEPC) 处理过的水配制

 

DEPC 处理过的水、

 

液态 N2

 

NaCl,1.2mol/L

 

柠檬酸钠,0.8mol/L

 

2. 特殊设备

 

转子-定子均化器（或相当的）

 

研钵和杵，在 DEPC 处理过的水中洗涤，液氮中预冻

50 ml 圆锥形管，例如 Falcon

 

3. 细胞和组织

 

合适的植物组织

 

二、方法

 

1. 液氮预冻过的研钵中研磨约 1g 植物组织，操作时使用足够的液氮淹没植物组织。

 

将组织研磨成很细的粉末，这点很重要。

 

2. 将粉末转移到 50 ml 圆锥形管中，管中已按每克组织 10 ml 的量加入 Trizol。

 

3. 使用转子-定子均化器均质化组织 30s。

 

4.4°C 下 1500 g 离心裂解产物 15 min 以移去残渣。

 

5. 将上清液转移到一新管中。每毫升 Trizol 加 200ul 氯仿。

 

6. 将管颠倒数次以混合。室温下温育 5 min。

 

7.4°C 下 1500 g 离心 20 min。将上清液转移到一新的 50 ml 管中。

 

8. 加 0.5 倍体积异丙酵和 0.5 倍体积的 0.8mol/L 柠檬酸钠、1.2mol/L 氯化钠溶

 

例如，对 500ul 体积的液相而言，应加 250ul 异丙醇和 250ul 柠檬酸钠溶液。

 

9 混合，室温下温育 1min。于-20°C 保存过夜可提高 RNA 产量。

10.4°C 下 1500 g 离心 20 min。

 

11. 移弃上清液，每毫升 Trizol加 lml70% 乙醇，以进行初步抽提。

 

12.1500 g 离心 15 min。小心移弃上清液，避免扰动沉降物。将沉降物风干。

 

13. 将 RNA 溶解于 DEPC 处理过的水中。

 

lg 成熟叶组织的 RNA 产量可达 500ug。

 

这个方案对含多酚化合物或树脂的植物组织可能不适用。对富含多酚、树脂或淀粉的提取困难的植物组织，推荐使用 ConcertPlantReagent(Invitrogen)。

此文转载来源：丁香通