ChIP染色质免疫沉淀技术 1

背景: 染色质免疫沉淀技术 (Chromatin Immunoprecipitation ,简称 ChIP) 是研究体内蛋白质与 DNA 相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性,可以真实地反映体内蛋白因子与基因组

蛋白质检测

蛋白印迹法 五 抗原 - 抗体反应 1 仪器和设备 塑料盒、振荡器。 2 封闭 一般采用 5% 脱脂奶粉进行封闭,室温, 30-60min 。 * 封闭液的浓度可以是( 1%-5% ),根据自己的条件摸索浓度就可

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蛋白印迹法 四转膜 操作步骤: 1 准备:切好的 PVDF 膜和滤纸置于甲醇 5min , PVDF 膜置于电转缓冲液浸泡 10min 以上。 * 转一张膜需 6 张 6cm ×9cm 滤纸和 1 张 6cm×9cmPVDF 膜,滤纸和膜的尺寸

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蛋白印迹法 三 电泳 电泳条件:电压200V,电流8mA,染料进入分离胶时电流增加到16mA,时间一般是2-3小时。 *溴酚蓝刚跑出胶即可终止电泳进行转膜,也可以根据时间经验停止电泳。 *电

蛋白质检测

蛋白印迹法 二 样品处理及上样 1、 取 15-20ug 蛋白,加 2 倍 SDS 上样缓冲液 7ul , DDW 定容至总体积 14ul 。 * 上样总体积一般少于 15ul ,加样孔的最大限度可加 20ul 样品。 2 、 95 ℃孵育

蛋白质检测

蛋白印迹( Western blot, WB )是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种试验方法,是将蛋白质通过 SDS-PAGE 电泳后,再转移到杂交膜上,然后通过抗原抗体复合物对特定蛋白质进

体外DNA重组技术

在体外将两个或多个来源相同或不相同的 DNA 片段连接成新的重组 DNA 分子,再转到特定宿主细胞中进行自主复制并表达。这是分子生物学中的基本技术。 DNA重组技术的基本程序包括:

转基因小鼠制备实验

1、 选取 7~8 周龄雌性小鼠,阴道口封闭,作为供体,下午 3:00 左右,每只小鼠腹腔注射 PMSG ( 10IU )。 2、 47~48 小时后,每只小鼠腹腔注射 HCG ( 0.8 IU ),并与正常公鼠合笼;另取数

蛋白质的表达、分离和纯化

目的要求 ( 1 )了解克隆基因表达的方法和意义。 ( 2 )了解重组蛋白亲和层析分离纯化的方法。 实验原理 克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达

蛋白质纯化与结晶的原理

获得蛋白质的晶体结构的第一个瓶颈,就是制备大量纯化的蛋白质( 10mg ),其浓度通常在 10mg/ml 以上,并以此为基础进行结晶条件的筛选。运用重组基因的技术,将特定基因以选殖(

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