1 直接免疫荧光法的操作步骤

标本的处理：

石蜡切片经脱蜡、梯度酒精脱水后，进行抗原修复，然后用0.01M PBST漂洗5min × 3/次；

•  2%BSA或10%BSA 37 C湿盒内封闭30min

•  抗体染色：

–  在标本片上滴加适当稀释的荧光标记抗体(1:8或1:16稀释)，放在湿盒中，37°C孵育30min；

•  0.0lmol/L PBS(pH 7.4) 漂洗5min × 3/次，不时震荡(洗去多余游离的荧光素标记的抗体)。

•  缓冲甘油封片

–  分析纯无荧光的甘油9份+ pH 9.2，0.2M碳酸盐缓冲液1份配制。

•  镜检：在荧光显微镜下观察。

•  优点：方法简便、特异性高，非特异性荧光染色少。

•  缺点：敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。若检测多种抗原需制备多种相应的荧光标记抗体。

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