启动子质粒（七）
质粒的制备、提取 启动子质粒 四、 培养基配方 1. LB 液体培养基 100ml 配方如下： 胰蛋白胨 1g 酵母提取物 0.5g NaCl 1g DDW 定容 100ml 2. LB 固体培养基 100ml 配方如下： 胰蛋白胨 1g 酵母提取
启动子质粒（六）
三、 质粒提取 （三） 质粒的纯化 附录： 1 OD260 和 OD280 的比值表示质粒的纯度。比值大于 1.8 ，说明纯化产物的纯度达到了 90% 。纯化好的质粒可用于转染实验，一般纯化步骤在细胞间
启动子质粒（五）
三、 质粒提取 （二） 收获细菌并裂解 1. 离心扩增好的菌液，按说明书将菌液重悬，转入 1.5ml 离心管中。 2. 用质粒小量抽提试剂盒，按说明书要求提取质粒。 3. 细菌高速离心 1min, 彻
启动子质粒（四）
三、 质粒提取 （一） 摇菌培养 1. 将鉴定测序正确的克隆菌液涂在 LB 固体平板。 2. 置于 37 ℃恒温培养箱，培养 12-17h ，待长出菌落。 3. 灭菌 15ml 离心管内加入 5ml 含抗生素的 LB 液体培
启动子质粒（三）
二、菌落制备主要环节 （四）转化 1、将感受态细胞DH5ɑ从-80℃冰箱中取出，立即置于冰中，使其在冰中融化。 2、连接产物加入DH5ɑ感受态细胞溶液中，轻轻吹打使连接产物分布均匀。
启动子质粒（二）
二、菌落制备主要环节 （二）双酶切 将PCR回收产物和pGL3-Basic空载体同时进行双酶切。 1.双酶切体系 （1）DNA回收片段酶切的试剂和剂量如下： Xho Ⅰ 1ul Hind Ⅲ 1uL DNA片段（300ng） _uL D
启动子质粒（一）
一、 操作前准备 1. 仪器设备 PCR 仪、 37℃ 恒温培养箱、 37℃ 恒温摇床、水浴锅、超净工作台、高速离心机等等。 2. 试剂 过表达载体质粒（ pGL3-Basic 等）、限制性内切酶、胶回收试剂
质粒的制备、提取（二）
背景（2）： 克隆的目的基因只有通过表达才能探索和研究基因的功能及基因表达调控的机制，明了其利用价值和途径。质粒包括基因过表达质粒、干扰质粒和启动子质粒等等多种类型
传统 ES 打靶 VS TurboKnockout® 基因敲除
上个世纪 80 年代，随着基因重组技术的不断完善和小鼠胚胎干细胞（ES）体外培养技术的成熟，基于同源重组的 ES 打靶得以建立。ES 打靶基因敲除技术修饰准确、效果稳定、成功率极高
DNA定量测定-Feulgen反应
实验背景与原理： DNA 是主要的遗传物质，集中于染色体上。在真核细胞中 DNA 主要存在于细胞核中，在线粒体和叶绿体中也有少量分布。 DNA 的基本组成单位是脱氧核糖核酸，它由脱氧
