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动物细胞转染技术


背景知识:

细胞转染技术是指将外源分子如DNARNA等导入整合细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究极影功能、调控极影表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。影响转染效率的因素有细胞株本身的特性和活性、细胞培养条件、转染的DNARNA的质量、转染方法、转染试剂的选择等。

常规转染技术可分为两大类,一类是瞬间转染,二是稳定转染。瞬时转染是外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中科存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其他调控元件的分析。一般来说,超螺旋质粒DNA转染效率较高,在转染后24h~72h内分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白、β-半乳糖苷酶等来帮助检测。稳定转染是指外源DNA既可以整合到宿主细胞染色体上,也可能作为一种游离体存在。外源DNA整合到染色体中概率很小,大约万分之一转染细胞能整合,通常需要一些选择性标记,如APHHPHTK等反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。

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