我要啦免费统计
动物细胞传代培养(一)

  贴壁细胞的传代

入无菌室之前首先要用肥皂或洗手液洗手,用新洁尔灭溶液擦拭双手消毒。

2 打开超净工作台的紫外消毒灯(紫外消毒20-30min)。从CO2培养箱取出培养细胞,倒置显微镜下观察细胞形态和生长密度,确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液置于37℃下预热。

3 关闭已照射超净工作台20min左右的紫外灯,打开抽风机清洁空气,除去臭氧。

4 点燃酒精灯,用75%乙醇擦拭双手消毒,并擦净台面。

5 将培养用液瓶身用75%酒精檫拭消毒后放入操作台内。

6 从培养箱中取出细胞培养瓶,经75%酒精喷洒消毒后立放于操作台内。

7 倒掉细胞旧培养液,4ml PBS洗涤两遍,解除残留血清对胰蛋白酶的抑制作用。

8 向培养瓶(25cm2)加入1ml的胰酶消化液,小瓶用量酬减。

9 盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察,立刻放入培养箱中消化,一般1-2min

10 当细胞突起收回即将变圆时立即取出。

11 加入5ml含血清的新鲜培养基,反复吹打贴壁细胞的培养瓶底部使消化好的细胞脱壁并分散,移入10ml离心管中,800 r/min2min

12 加入1-2ml培养基制成细胞悬液并计数。根据计数结果,按每个小方瓶2×105接种细胞传代培养。

13 盖上瓶盖,适度柠紧后再稍旋回,给出空气通道,以利于CO2气体的进出,将培养瓶放回培养箱。

想了解更多相关信息,请关注: http://www.chinazglab.com/
    咨询更多实验情况可以联系晏老师,联系电话:15870661478 (微信同号)


上一篇:动物组织培养准备技术之清洗与灭菌(2)
下一篇:培养基的配制
分享到: