实时荧光定量PCR！！
实时荧光定量P CR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度
菌落PCR
实验方法原理 直接挑取菌落进行PCR，PCR的95℃加热可以破胞，释放基因组DNA或质粒，成为PCR体系的模板，然后进行链式扩增。 实验材料基因样品 试剂、试剂盒dNTPPCR混合液 仪器、耗材
直接原位PCR（In situ PCR）
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行
逆转录 RT-PCR 聚合酶链反应3
1．反转录酶的选择 （1） Money 鼠白血病病毒（MMLV）反转录酶：有强的聚合酶活性，RNA酶H活性相对较弱。最适作用温度为37℃； （2）禽成髓细胞瘤病毒（AMV）反转录酶：有强的聚合酶活
PCR污染与对策
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污 染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生. 一、污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标
PCR扩增产物的克隆
实验方法原理 平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头；PCR产物纯化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用该酶所具有的
PCR扩增产物的克隆2
实验材料模板DNA 试剂、试剂盒SauIKlenow片段T4连接酶 仪器、耗材移液器移液器吸头PCR小管DNA扩增仪电泳槽电泳仪台式高速离心机 实验步骤 一、PCR反应 1. 依次混匀下列试剂 （1）H2O：35
逆转录 RT-PCR 聚合酶链反应2
注意事项 1．在实验过程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在总RNA的提取过程中，注意避免mRNA的断裂； 2． 为了防止非特异性扩增，必须设阴性对照； 3．内参的设定：主要为了用
逆转录 RT-PCR 聚合酶链反应1
实验方法原理 逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反
巢式PCR
巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应（PCR），使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片
