PCR技术大攻略
一、PCR技术及步骤 聚合酶链式反应（PCR） PCR扩增产物的克隆 上述两个实验包含基本原理、步骤、问题等。 二、PCR常见问题汇总 1. 没有得到扩增产物 （1）酶失活或在反应体系中未加入
聚合酶链式反应(PCR)扩增
材料、设备及试剂 一、材料 不同来源的模板DNA。 二、设备 移液器及吸头，硅烷化的PCR小管，DNA扩增仪(PE公司)，台式高速离心机。 三、试剂： 1、10×PCR反应缓冲液：500mmol/L KCl, 100mmo
甲基化特异性PCR(MSP)
1. MSP原理 ：MSP是一种简便、特异的、敏感的检测单基因甲基化的方式。其基本原理是用亚硫酸氢钠处理基因组DNA，未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，然后用3对特
甲基化PCR检测方法
一、基因组DNA的提取 此步重点在于DNA的纯度，即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者。 使用两者的细节： 1. 蛋白酶K可以使用灭菌双
PCR基本实验方法
Reagent Concentrations: Primers: 0.2 - 1.0 uM Nucleotides: 50 - 200 uM EACH dNTP Dimethyl sulphoxide (DMSO): 0 - 10% (v/v) Taq polymerase: 0.5 - 1.0 Units/50ul rxn Target DNA : 1 ng - 1 ug (NB: higher concn for total genomic DNA ; lower for
聚合酶链反应一单链构象多态性分析 (PCR-SSCP)
聚合酶链反应-单链构象多态性分析（Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR -SSCP）是近年来发展起来的一种基因分析方法。 PCR -SSCP分析的基本程序为：首
琼脂糖凝胶电泳检查PCR产物
1. 用0.5X或1XTBE制备2%（W/V）琼脂糖凝胶，加入适量的溴化乙锭。 2. 琼脂糖凝胶的长度与宽度应该与PCR扩增管数量相适应，每一扩增管应有相应的一个电泳泳道，凝胶厚度为3~5 mm，一般用
克隆PCR产物
克隆PCR扩增DNA片段至质粒或噬粒载体这一过程看似容易，实际操作较难。下面四个方案将叙述扩增DNA片段的克隆难题： 1. PCR产物的平末端克隆。 2. 克隆化的PCR产物连入T载体。 3. 通过
差异性甲基化杂交(DMH)
1. 微阵列构建 （1）基因组片段化：将雄性个体（雄性个体包括完整的染色体，即含有Y染色体）基因组DNA经MseI消化（MseI识别位点为TTAA，可以保证富含CpG的片段不被破坏）成约200 bp 的小
基因组非特异性甲基化水平的研究
1. 3H―SAM掺入后液闪检测法 （1）将约2 μg 基因组与足量3H标记的SAM，甲基化酶（SssⅠ或HpaⅡ）共同温育，SAM的甲基化基团将被掺人到目的DNA中未甲基化的胞嘧啶上。 （2）以WhatmanDE81滤纸
