蛋白质检测四

蛋白印迹法

电泳

      *考马斯亮蓝法:用40%双蒸水/10%醋酸/50%甲醇的溶液固定胶中蛋白,考马斯亮蓝R-250染色室温染色4h过夜,保持摇匀转入67.5%双蒸水/7.5%醋酸/25%甲醇摇匀脱色,蛋白被染成深蓝色。

 

四 转膜

      转膜方式有半干式和湿转两种。半干式转膜速度快,但高分子量蛋白转膜效果较差。高分子量蛋白质与胶相互作用较强,从胶中移出较难。因此,一般大于120-150kDa的蛋白用半干式转膜时,可选用碱性电转缓冲液,也可在电转缓冲液中加SDS。但SDS妨碍蛋白与膜的结合,尤其对小分子蛋白。湿转成功率高,特别适用于大分子量(大于100kDa)的蛋白。


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