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质粒的制备、提取八

三、 质粒提取 (二) 收获细菌并裂解 1. 离心扩增好的菌液,按说明书将菌液重悬,转入 1.5ml 离心管中。 2. 用质粒小量抽提试剂盒,按说明书要求提取质粒。 3. 细菌高速离心 1min, 彻

质粒的制备、提取七

三、 质粒提取 (一) 摇菌培养 1. 将鉴定测序正确的克隆菌液涂在 LB 固体平板。 2. 置于 37 ℃恒温培养箱,培养 12-17h ,待长出菌落。 3. 灭菌 15ml 离心管内加入 5ml 含抗生素的 LB 液体培

质粒的制备、提取六

二、 菌落制备主要环节 (四) 转化 1、 将感受态细胞 DH5ɑ 从 -80 ℃冰箱中取出,立即置于冰中,使其在冰中融化。 2、 连接产物加入 DH5ɑ感受态细胞溶液中,轻轻吹打使连接产物分布

质粒的制备、提取五

二、 菌落制备主要环节 (三) 连接 将回收的 PCR 产物连接入 pGL3-Basic 载体中,反应体系如下: T4 连接酶 1uL 5×buffer 1uL 酶切质粒( 50ng ) _ul 酶切 DNA 片段( 100ng ) _uL DDW 20uL * 16℃连接

质粒的制备、提取四

二、 菌落制备主要环节 (二) 双酶切 将 PCR 回收产物和 pGL3-Basic 空载体同时进行双酶切。 1. 双酶切体系 (1) DNA 回收片段酶切的试剂和剂量如下: Xho Ⅰ 1ul Hind Ⅲ 1uL DNA 片段( 300

质粒的制备、提取三

一、 操作前准备 1. 仪器设备 PCR 仪、 37℃ 恒温培养箱、 37℃ 恒温摇床、水浴锅、超净工作台、高速离心机等等。 2. 试剂 过表达载体质粒( pGL3-Basic 等)、限制性内切酶、胶回收试剂

质粒的制备、提取二

背景( 2 ): 克隆的目的基因只有通过表达才能探索和研究基因的功能及基因表达调控的机制,明了其利用价值和途径。质粒包括基因过表达质粒、干扰质粒和启动子质粒等等多种类型

质粒的制备、提取一

背景( 1 ): 质粒是一种双链共价闭合的环状 DNA ,是染色体以外的稳定遗传因子。已经在细菌、真菌以及部分动植物细胞中发现质粒,以细菌中存在质粒最为普遍。质粒的制备与提取

DNA定量测定-Feulgen反应一

实验步骤 1.切片经脱蜡入水。 2. 用 1mol/L HCl 浸洗。 3. 切片放入 60 ℃预热的 1mol/L HCl 内 8min 。 4. 室温下 1mol/L HCl 浸洗。 5. 蒸馏水浸洗 2 次,每次 5min. 6. 加入席夫液,于室温反应 30-60

基因芯片技术八

七 结果的分析 样品在被测定前,首先要经过消化,使待测组织细胞中的 DNA 或 RNA 释放出来,在经过适当的扩增后,以荧光标记物标记,放入基因芯片自动孵育装置( Fluidics Station )中

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