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ChIP染色质免疫沉淀技术

ChIP 技术的应用 染色质免疫沉淀技术还可用于分析两种蛋白共同结合的 DNA 序列,即 ChIP reChIP 方法。 ChIP reChIP 是在第一次 ChIP 的基础上不解交联,而继续进行另一个目的蛋白的免疫沉淀

ChIP染色质免疫沉淀技术

染色质免疫沉淀中的对照与抗体选择 抗体选择: 染色质免疫沉淀所选择的目的蛋白的抗体是 ChIP 实验成功的关键。因为在蛋白质与染色质交联结合时,抗体的抗原表位可能因为与结合

蛋白质检测(五)

蛋白印迹法 四转膜 操作步骤: 1 准备:切好的 PVDF 膜和滤纸置于甲醇 5min , PVDF 膜置于电转缓冲液浸泡 10min 以上。 * 转一张膜需 6 张 6cm ×9cm 滤纸和 1 张 6cm×9cmPVDF 膜,滤纸和膜的尺寸

蛋白质检测一

蛋白印迹法 蛋白印迹( Western blot, WB )是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种试验方法,是将蛋白质通过 SDS-PAGE 电泳后,再转移到杂交膜上,然后通过抗原抗体复合物对

蛋白质检测(七)

蛋白印迹法 五 抗原 - 抗体反应 4 二抗的处理 (1) 常用二抗: HRP 偶联二抗。也可用碱性磷酸酶标记二抗,但不够灵敏。 (2) 二抗稀释液: PBS/PBS-T 液、 TBS/TBS-T 液、一般的封闭液等

蛋白质检测(十六)

凝胶迁移或电泳迁移率实验 实验步骤: 5.洗膜 (9) 加入 6mlLuminol/Enhancer Solution 和 6ml Stable Peroxide Solution, 避光置于锡箔纸包好的烧杯中,摇匀,作为 Substrate Working Solution 。 (10) 将膜

蛋白质检测(十五)

凝胶迁移或电泳迁移率实验 实验步骤: 5.洗膜 (1)将封闭液和4倍洗涤液置于37-50℃溶解。 (2)用20ml封闭液封闭尼龙膜,温浴15min,摇船轻摇。 (3)20ml封闭液中加入66.7ul Stabilized S

蛋白质检测(十四)

凝胶迁移或电泳迁移率实验 实验步骤: 1. 探针的标记 探针为含有与蛋白特异性结合的中心盒,大约 20bp 。 2. 非变性电泳 (1) 制备 4% 非变性胶 (2) 制备样品 (3) 电泳:预跑胶

蛋白质检测(十三)

凝胶迁移或电泳迁移率实验 凝胶迁移或电泳迁移率实验( EMSA )是一种研究 DNA 结合蛋白和其相关的 DNA 结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。通常将纯化的蛋白或细胞粗

蛋白质检测(十二)

七、蛋白印迹实验常见问题及原因分析 1. 没有带? 原因:样品中抗原含量不足(抗原表达量过低;蛋白降解;上样量不足;样品制备错误);制胶浓度比例不合适;转膜不完全;一抗

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