蛋白质检测三
蛋白印迹法 三 电泳 电泳条件：电压 200V ，电流 8mA ，染料进入分离胶时电流增加到 16mA ，时间一般 2-3 小时。 * 溴酚蓝刚跑出胶即可终止电泳进行转膜，也可以根据时间经验停止电泳。
蛋白质检测二
蛋白印迹法 二 样品处理及上样 1、 取 15-20ug 蛋白，加 2 倍 SDS 上样缓冲液 7ul ， DDW 定容至总体积 14ul 。 * 上样总体积一般少于 15ul ，加样孔的最大限度可加 20ul 样品。 2 、 95 ℃孵育
ChIP染色质免疫沉淀技术
Input 对照： 在进行免疫沉淀前，需要取一部分断裂后的染色质做 Input 对照。 Input 是断裂后的基因组 DNA ，需要与沉淀后的样品 DNA 一起经过逆转交联， DNA 纯化，以及最后的 PCR 或其他
ChIP染色质免疫沉淀技术
2. 染色质断裂 交联后的染色质可被超声波或 Micrococcal Nuclease 切成 400~600 bp 的片段 ( 用琼脂糖凝胶电泳检测 ) ，以便暴露目标蛋白，利于抗体识别。超声波是使用机械力断裂染色质，容
ChIP染色质免疫沉淀技术
1. 细胞固定 甲醛能有效的使蛋白质 - 蛋白质，蛋白质 -DNA ，蛋白质 -RNA 交联，形成生物复合体，防止细胞内组分的重新分布。甲醛的交联反应是完全可逆的，便于在后续步骤中对 DNA 和
ChIP染色质免疫沉淀技术
chip 技术的原理 染色质免疫沉淀技术的原理是：在生理状态下把细胞内的 DNA 与蛋白质交联在一起，通过超声或酶处理将染色质切为小片段后，利用抗原抗体的特异性识别反应，将与目
免疫共沉淀四
RIPA Buffer 配置 1. 基础成分 （1） Tris-HCl （防止蛋白变性的缓冲液成分） （2） NaCl （防止非特异性蛋白聚集的盐分） （3） NP-40 （用 H2O 配置成 10% 储存液。 NP-40 为非离子去污剂，用于
免疫共沉淀三
15. 14000rpm 瞬时离心 5s ，去上清，收集琼脂糖珠 - 抗原抗体的复合物。 16. 用 800ul 预冷 RIPA buffer 冲洗 3 遍。 17. 用 60ul 2 倍上样缓冲液将琼脂糖珠 - 抗原抗体复合物悬起，轻轻敲打混匀。
免疫共沉淀二
具体步骤： 8. 4 ℃， 14000g 离心 15min ，将上清转移到一个新的离心管中。 9. 测定蛋白浓度，可选用 Bradford 法做蛋白标准曲线。 10. 蛋白定量，分装， -20 ℃保存，可保存 1 个月。 11. 用
免疫共沉淀一
具体步骤： 1. 细胞用预冷的 PBS 液洗涤 2 次，最后洗涤完成后吸干 PBS 液。 2. 加入预冷的 RIPA Buffer （ 1ml/107 个细胞、 6cm 培养皿、 75cm2 培养瓶）。 3. 刮留细胞：用预冷的细胞刮子将细
