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荧光素酶及其报告基因的应用和检测(六)

中荧光素酶的发光,曝光 10min , binning3x3 四 荧光素酶报告基因的检测方法 依赖生物发光特性 , 利用闪烁计数器 ( scintillationcounter) 对荧光素酶的活性作出定量检测。在标准反应条件下

荧光素酶及其报告基因的应用和检测(五)

3 荧光素酶作为报告基因的优势:  内源性低,哺乳动物无内源性表达  荧光素酶检测不受细胞内其他物质影响  发光检测,检测方便  灵敏度高,10‐20摩尔荧光素酶分子  检测

荧光素酶及其报告基因的应用和检测(四)

三 荧光素酶报告基因 2 报告基因简单实验流程 构建包含有报告基因的质粒 将构建好的质粒转染细胞 提供相应的刺激(诱导) 检测报告基因 数据分析 3 荧光素酶作为报告基因的优势

荧光素酶及其报告基因的应用和检测(三)

三 荧光素酶报告基因 报告基因( report gene )是一种易于检测蛋白质或酶等表达产物的基因,可通过报告基因产物的表达来“报告”目的基因的表达调控。通常把报告基因的编码序列和

荧光素酶及其报告基因的应用和检测

二 荧光素酶 荧光素酶( Luciferase )是生物体内催化荧光素 (luciferin) 或脂肪醛 (firefly aldehyde) 氧化发光的一类酶的总称 , 来自于自然界能够发光的生物。 自然界存在的荧光素酶来自萤火

荧光素酶及其报告基因的应用和检测(一)

一 生物发光 生物发光( bioluminescence ) 是指生物体发光或生物体提取物在实验室中发光的现象。它不依赖于有机体对光的吸收,而是一种特殊类型的化学发光, 化学能转变为光能的效

双萤光素酶报告基因检测 (miRNA靶基因验证)实验 (四)

4. 实验步骤 实验共分以下 3 个主要步骤: 1. 质粒转染细胞;2. 双报告基因检测; 3. 统计学分析。 2. 双报告基因检测 (1) 质粒共转染 48 小时后,弃去培养基,用 100 μ l 1XPBS 洗 1 遍 (2)

双萤光素酶报告基因检测 (miRNA靶基因验证)实验 (三)

4. 实验步骤 实验共分以下 3 个主要步骤: 1.质粒转染细胞;2. 双报告基因检测; 3. 统计学分析。 1. 质粒转染细胞 : (1) 细胞铺板:将细胞按 70% 的汇合度接种到 96 孔板。 (2) 转染:

双萤光素酶报告基因检测 (miRNA靶基因验证)实验 (二)

实验目的 : 验证 hsa-mir-21 与靶基因 Tropomyosin 1 3 ’ UTR 是否发生作用并进一步确定 hsa-mir-21 与靶基因 Tropomyosin 1 3 ’ UTR 的作用位点 。 实验材料 1. 质粒与细胞株 pMIR- 对照质粒(和元生物

双萤光素酶报告基因检测 (miRNA靶基因验证)实验

萤光素酶是理想的报告基因,因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶,一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响,而双报告基因则

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