双萤光素酶报告基因检测 （miRNA靶基因验证）实验 （二）
实验目的 : 验证 hsa-mir-21 与靶基因 Tropomyosin 1 3 ’ UTR 是否发生作用并进一步确定 hsa-mir-21 与靶基因 Tropomyosin 1 3 ’ UTR 的作用位点 。 实验材料 1. 质粒与细胞株 pMIR- 对照质粒（和元生物
双萤光素酶报告基因检测 （miRNA靶基因验证）实验
萤光素酶是理想的报告基因，因为哺乳动物细胞中不含内源性萤光素酶，一旦转录完成立刻就生成功能性的萤光素酶。单报告基因实验往往会受到各种实验条件的影响，而双报告基因则
细胞中mRNA原位杂交技术（六）
附 2 ：探针的选择与标记（续） 1. DNA 和 RNA 探针 其原理是克隆一段特异的 DNA 或 RNA 片段，装载到相应的质粒中。经过质粒扩增，酶解和纯化等步骤，就可以得到大量的 DNA 和 RNA 片段。
细胞中mRNA原位杂交技术（五）
附 2 ：探针的选择与标记 1.探针选择 特异性的探针必须是一段已知的基因片段。相对于膜上杂交而言，原位杂交有特殊性。即细胞和组织中的待测基因隐藏于类似于网络状的立体结构之
细胞中mRNA原位杂交技术注意事项
注意事项： 1 原位杂交固定的目的是为了保持细胞结构，最大限度地保存细胞内 DNA 或 RNA 的水平，使探针易于进入细胞或组织。 DNA 较稳定， RNA 易被酶解，在 RNA 定位上，若要使 RNA 的
细胞中mRNA原位杂交技术二
实验原理及技术背景 1 ： 原位杂交组化（ ISHH ）属于分子杂交的一种，是一种应用标记探针与组织细胞中的待测核酸杂交，再应用标记物的检测系统，在核酸原有的位置将其显示出来的
荧光素酶及其报告基因的应用和检测
四 荧光素酶报告基因的检测方法 依赖生物发光特性 , 利用闪烁计数器 ( scintillationcounter) 对荧光素酶的活性作出定量检测。在标准反应条件下 , 加入超量底物 , 经一定时间内 , 荧光闪烁
荧光素酶及其报告基因的应用和检测
3 荧光素酶作为报告基因的优势： ² 内源性低，哺乳动物无内源性表达 ² 荧光素酶检测不受细胞内其他物质影响 ² 发光检测，检测方便 ² 灵敏度高， 10 ‐ 20 摩尔荧光素酶分子 ² 检测
荧光素酶及其报告基因的应用和检测八
三 荧光素酶报告基因 2 报告基因简单实验流程 l 构建包含有报告基因的质粒 l 将构建好的质粒转染细胞 l 提供相应的刺激（诱导） l 检测报告基因 l 数据分析 3 荧光素酶作为报告基因的
荧光素酶及其报告基因的应用和检测七
三 荧光素酶报告基因 报告基因（ report gene ）是一种易于检测蛋白质或酶等表达产物的基因，可通过报告基因产物的表达来“报告”目的基因的表达调控。通常把报告基因的编码序列和
