荧光素酶及其报告基因的应用和检测五

一 生物发光 生物发光( bioluminescence ) 是指生物体发光或生物体提取物在实验室中发光的现象。它不依赖于有机体对光的吸收,而是一种特殊类型的化学发光, 化学能转变为光能的效

双萤光素酶报告基因检测(miRNA靶基因验证)实验三

4. 实验步骤 实验共分以下 3 个主要步骤: 1.质粒转染细胞;2. 双报告基因检测; 3. 统计学分析。 1. 质粒转染细胞 : (1) 细胞铺板:将细胞按 70% 的汇合度接种到 96 孔板。 (2) 转染:

双荧光素酶报告基因检测 (miRNA靶基因验证)实验二

实验目的 : 验证 hsa-mir-21 与靶基因 Tropomyosin 1 3 ’ UTR 是否发生作用并进一步确定 hsa-mir-21 与靶基因 Tropomyosin 1 3 ’ UTR 的作用位点 。 实验材料 1. 质粒与细胞株 pMIR- 对照质粒(和元生物

细胞中mRNA原位杂交技术七

探针标记 各种不同类型的探针需要经过恰当的标记,才能在原位杂交中应用。 DNA探针一般采用的标记方法为随机引物标记和缺口平移法。寡核苷酸探针则主要采用3'末端标记。目前标

细胞中mRNA原位杂交技术六

附 2 :探针的选择与标记(续) 1. DNA 和 RNA 探针 其原理是克隆一段特异的 DNA 或 RNA 片段,装载到相应的质粒中。经过质粒扩增,酶解和纯化等步骤,就可以得到大量的 DNA 和 RNA 片段。

PAT法分析mRNA Poly(A)尾长度实验

实验方法原理 PAT法 [ PCR poly(A) test ] 可以快速、灵敏地从总 RNA 中分析特异 mRNA,而且可以定量估算 RNA poly(A) 尾长度。这方法中,包括 cDNA 合成的整个操作过程都在一个反应管中完成,不

细胞中mRNA原位杂交技术五

附2:探针的选择与标记 1.探针选择 特异性的探针必须是一段已知的基因片段。相对于膜上杂交而言,原位杂交有特殊性。即细胞和组织中的待测基因隐藏于类似于网络状的立体结构之

细胞中mRNA原位杂交技术四

附表 1 :部分试剂配制 1 0.1mol/L 三乙醇胺 -0.25% 乙酸酐:三乙醇胺 13.2ml ,氯化钠 5g ,浓盐酸 4ml , DEPC 水定容至约 1000ml ,临用前,一边摇动溶液一边加入乙酸酐 2.5ml ,充分混合。 2

细胞中mRNA原位杂交技术三

注意事项: 1 原位杂交固定的目的是为了保持细胞结构,最大限度地保存细胞内 DNA 或 RNA 的水平,使探针易于进入细胞或组织。 DNA 较稳定, RNA 易被酶解,在 RNA 定位上,若要使 RNA 的

细胞中mRNA原位杂交技术二

实验步骤: 二.杂交与显色 1 、将加入探针的杂交液先于 50 ℃预热,均匀涂于切片表面,加上硅化盖玻片,放于湿盒中, 50 ℃孵育 12-16h 。 2 、 1 ×SSC (含 50% 甲酰胺), 50 ℃洗涤

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