一、免疫组化染色意义

组织细胞内具有抗原性的物质，如肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等等均可用免疫组织化学方法显示，因而目前在基础与临床科研中被广泛应用。最近几年，分子生物学研究异常活跃，但最终还要归到形态上来。用免疫组织化学方法对所研究的大分子分子进行定位，进而深入研究其功能。

二、免疫组化染色原理

应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。

三、免疫组化染色步骤

1、石蜡切片脱蜡至水。

2、3%H2O2室温孵育5~10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。

3、蒸馏水冲洗，PBS 浸泡5 分钟，(如需采用抗原修复，可在此步后进行)。

4、5~10％正常山羊血清（PBS 稀释）封闭，室温孵育10 分钟。倾去血清，勿洗，滴加5、

5、适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2 小时或4℃过夜。

6、PBS 冲洗，5 分钟×3 次。

7、滴加适当比例稀释的生物素标记二抗（1%BSA-PBS 稀释），37℃孵育10~30 分钟；

8、加第二代生物素标记二抗工作液，37℃或室温孵育10~30 分钟。

9、PBS 冲洗，5 分钟×3 次。

10、滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素（PBS 稀释），37℃孵育10~30 分钟；或第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃或室温孵育10~30 分钟。

11、PBS 冲洗，5 分钟×3 次。

12、显色剂显色（DAB 或AEC）。

13、自来水充分冲洗，复染，封片。

四、免疫组化染色要点

1、必须彻底抑制内源性过氧化物酶的活性，才能降低背景的染色。

2、须适当合理地使用封闭试剂。

3、选择合适的孵育时间。

4、连接抗体的选用必须正确，否则可造成假阴性的现象。

5、切片脱蜡必须干净，否则将会影响免疫组化染色的最后结果。

此文转载：丁香通