SDS-PAGE,蛋白转印,western Blot试剂配制

1.5 mol/L Tris (PH8.8) 

1.称量181.7g Tris置于1L烧杯中。

2.加入约800 ml去离子水,充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调节pH值至8.8。

4.定容至1L.

5.高压灭菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1oC,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

 

1 mol/L Tris (PH6.8) 

1.称量121.1g Tris置于1L烧杯中。

2.加入约800 ml去离子水,充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需的pH值。

pH值 浓HCl

6.8 

7.4 约70 ml

7.6 约60 ml

8.0 约42 ml

4.定容至1L.

5.高压灭菌后,室温保存。

注意:1.溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1oC,溶液的pH值大约降低0.03个单位。2. 如1 mol/L溶液呈现黄色,应予丢弃,并置备质量更好的Tris。

 

30%丙稀酰胺(100ml) 

1.称量下列试剂置于烧杯中。

丙烯酰胺(Acrylamide) 29 g

双丙烯酰胺 (BIS) 1 g

2.加入约60 ml去离子水,充分搅拌溶解。

3.定容至100 ml, 用0.45 µm滤膜滤去杂质。

5.于棕色瓶中4 oC保存。

注意:1. 丙烯酰胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成分。

 

 

30% SDS 

1.称量10 g 高纯度(电泳级)的SDS置于100~200 ml烧杯中。

2.加入约800 ml去离子水,68oC加热溶解。

3.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。

4.定容至100 ml,室温保存。

此文转载:丁香通

 

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