试剂、试剂盒

      无水乙醇   异丙醇   的乙醇  甲酰胺   3mol L 的乙酸钠

仪器、耗材

      高速离心机   紫外分光光度计

实验步骤

一材料与设备

     所有的试剂配制均需采用经过蒸馏并消毒的去离子水。

      1) 无水乙醇

      2) 异丙醇

      3)75% 的乙醇

      4)100% 甲酰胺

      5)3mol/L 的乙酸钠

      6) 高速离心机

      7) 紫外分光光度计


二操作方法

      1) 使用 CsCl 法，酸-苯酚法，TRIol 法或 RNaolB 法进行 RNA 的一步提取。

      2) 用无水乙醇 (CsCl 法）或异丙醇 (其他方法）沉淀 RNA, 离心获得 RNA 沉淀。

      3) 用 75% 的乙醇清洗 RNA 沉淀以除去多余的盐分。

      4) 晾干，尽量吸去乙醇，并确保 RNA 中没有多余的乙醇存在。

      5) 用保存的 100% 甲酰胺重悬 RNA。甲酰胺的用量应视 RNA 沉淀的多少而定，通常用量在 10ul 到 1000ul 之间。

      6) 大部分的 RNA 可立即溶解，可以在室温放置 15 min，并用吸头不时的上下吹打液体，以促进 RNA 的溶解。如果 RNA 的浓度很高，可以在 4℃ 放置过夜，以促进其完全溶解。

      7) 定量时，将 1ul RNA 溶液稀释到 500ul 水中，测量其 OD₂₆₀ 值

      8) 如果样品被过分稀释了，可以像水溶的 RNA 样品一样进行乙醇沉淀浓缩，加水溶解后使用。

注意事项

      1)当使用 CsCl 法进行 RNA 的提取时，更应注意 RNA 多余盐分的去除。

      2)“操作方法”第4)步中，RNA 不要过分干燥。

      3)测量 RNA 的 OD 值时，应在空内对照中加入 1ul 甲酰胺，以消除 RNA 产物中由于甲酰胺的加入而带来的可能的背景

此文转载：丁香通