试剂、试剂盒

      大鼠肝脏   苯酚 -甲酚混合液   萘 1.5-二磺酸溶液   洗涤液 A   洗涤液 B   乙醇溶液   三异丙基萘磺酸钠   无水乙醇

实验步骤

一 材料与设备

      1）大鼠肝脏 ：大鼠用颈部击打法处死 ，取出肝脏 ，立即置于液氮屮 ，备用
    
      2）苯酚 -甲酚混合液 ：将 500 g 苯酚（须重结晶）及 70 mlm-甲酚溶于 50 m l 蒸馏水中 ，并加入 0.5 g8-羟基喹啉
  
      3）萘 1.5-二磺酸溶液：0 .5 g 萘 1.5 -二磺酸 溶 于 100 ml 蒸馏中
    
      4）洗涤液 A:20 g 苯甲酸 钠 ，10 ml m- 甲酚 及 3 g 氯化钠溶于 100 ml 蒸馏水中
       
      5）洗涤液 B: 75 ml 无水乙醇及  l g  氦化钠溶溶于 25 ml 蒸馏水中
       
       6)75.% 乙醇溶液   
 
      7)三异丙基萘磺酸钠  
  
      8)无水乙醇


二 操作方法

     1）称取鼠肝 15g 左右，加于10 倍体积的苯酚-甲酚混合溶液以及 10 倍体积的萘 5-二磺酸溶液.在下用匀浆器匀浆

      2)将匀浆液取出置于烧杯中.2℃ 搅拌 20min,于50℃，6000g 离心 15min，弃沉淀，

      3)上淸液加入三异丙萘磺酸钠，至最终浓度为5%,再加入 1/2 体积的苯酚-甲酚溶液，于 20℃搅拌 20min,然后以 8000g,5℃ 离心 lOmin.弃沉淀

      4)在每 100ml 离心上清液屮依次加入 3g 氯化钠，2g 苯甲酸钠及 10ml m-甲酌。搅拌溶解均匀后，用 8OOOg，5℃ 离心 lOmin。弃上清液。

      5)将沉淀物按下列顺序离心洗涤：用冷的洗涤液A 洗二次,洗涤液 B、75% 乙醇溶液各洗一次，再用无水乙醇冼二次，每次均用 25ml 最后得纯的鼠肝 rRNA.取出 rRNA，置于装有 CaCl2 的真空干燥器中干燥。

此文转载：丁香通