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双萤光素酶报告基因检测 (miRNA靶基因验证)实验 (四)

4.实验步骤  

实验共分以下3个主要步骤:  

1. 质粒转染细胞;2.双报告基因检测;3. 统计学分析。

2. 双报告基因检测  

(1) 质粒共转染48小时后,弃去培养基,用100μl 1XPBS1

(2) 倾斜96孔板,吸干剩余的PBS  

(3) 去离子水将5XPLB稀释成1XPLB,使用前放到常温  

(4) 每孔加50μl稀释好的 1X PLB,摇床常温条件下摇15min,进行裂 解  

(5) 白色不透光的96孔酶标板中每孔加步骤4的上清液10μl, 加入100 μl预先混好的LAR II2s后测数据   

(6) 每孔添加100μl预先混好的Stop&Glo Reagent,静止2s后,测数 据  注意:进行Luciferase活性检测时,需在避光条件下进行。

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