培养原代细胞实验的一些方法
发布人：管理员 浏览次数： 发布时间：2017-04-10
细胞原代培养的目的是为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段，为传代培养创造条件，服务于临床实践，用于药物筛选等。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
培养箱 培养瓶 青霉素瓶 小玻璃漏斗 平皿吸管 移液管 纱布 手术器械 血球计数板 离心机 水浴箱
实验步骤
一、1. 加入3-5 ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。
2. 静置5-10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。
3. 1 000 rpm，离心10分钟，弃上清液。
4. 加入Hank’s液5 ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。
5. 加入培养液1-2 ml（视细胞量），血球计数板计数。
6. 将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25 ml细胞培养瓶中，37℃下培养。
1. 自取材开始，保持所有组织细胞处于无菌条件。细胞计数可在有菌环境中进行。
2. 在超净台中，组织细胞、培养液等不能暴露过久，以免溶液蒸发。
3. 凡在超净台外操作的步骤，各器皿需用盖子或橡皮塞，以防止细菌落入。
4. 操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。
5. 点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。
6. 操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。
7. 不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。
8. 瓶子开口后要尽量保持45°斜位。
9. 吸溶液的吸管等不能混用。
实验方法原理
将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。最常用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。
此文引用丁香通
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