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流式细胞术检测细胞周期

1实验原理  

      用流式细胞仪检测细胞周期,通常用碘化丙啶(propidium iodidePI)染细胞核。PI在一定波长的光下发出荧光,其强度与DNA含量成正比。通过流式细胞仪分析各时期的细胞百分数,可检测细胞的增殖、凋亡。

2流式细胞仪检测A549细胞周期步骤  

      收集对数生长期细胞,计数,以(1~5)×105/孔接种于6孔板,置37℃,5CO2条件下培养过夜,使细胞贴壁。次日更换培养液,各孔分别加入含有080400200010000 mg/L不同浓度茶氨酸的细胞培养液2 mL/孔,继续常规培养;每24 h同法换液一次。每个浓度设3个重复。  48 h后,中止培养,胰酶消化后,收集细胞于流式管1000 r/min离心5min,弃上,冷PBS洗涤细胞3次,离心去上清;  一边震荡一边向细胞沉淀中加入70%预冷乙醇混匀,4℃固定18 h以上;离心,弃去乙醇上清,加入预冷的PBS洗沉淀1次,离心去上清;  加入RNA酶(50 mg/L10 μL/孔和PI50 mg/L300 μL/孔,震荡混匀。室温、避光反应30 min;  流式细胞仪进行DNA检测,用Modifit软件分析各时相细胞周期的比例。


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